裂解型基因重組腺病毒對人黑色素瘤細胞及小鼠肝癌抑瘤作用的實驗研究.pdf

1、目的：構(gòu)建裂解型腺病毒載體，研究其體外對黑色素瘤細胞及小鼠腹水型肝癌的抑制作用。 方法：利用本室已構(gòu)建的pUCm-T-E1A質(zhì)粒為模板進行PCR，將目的片段用HindⅢ、EcoRV雙酶切后連接到帶有GFP標記的pAdTrack-CMV質(zhì)粒上，PmeI線性化重組質(zhì)粒pAdTrack-CMV-E1A與腺病毒質(zhì)粒pAdeasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183細菌，獲得重組腺病毒表達載體pAdeasy-1-pAdTradck-CMV-E1A經(jīng)pa

2、cI線性化后轉(zhuǎn)染QBI-293A細胞；收獲病毒重組子。將獲得的重組病毒子感染A375黑色素瘤細胞。然后分別用RT-PCR、流式細胞儀及MTT法等方法鑒定E1A基因的表達并且研究其對小白鼠腹水型肝癌的抑制及其免疫功能的影響。 結(jié)果：成功構(gòu)建了裂解型腺病毒Ad-E1A，可顯著裂解A375黑色素瘤細胞，抑制細胞生長。Ad-E1A可體內(nèi)抑制小鼠腹水型肝癌的生長，且對小鼠的免疫器官沒有抑制，同時可提高中性粒細胞和單核細胞的數(shù)目。