大骨雞、青殼蛋雞成纖維細胞庫的建立及生物學特性研究.pdf

1、本論文選取了大骨雞、青殼蛋雞等我國地方品種雞為研究對象，各品種取8日胚胎，采用組織塊細胞貼壁培養(yǎng)法，分別成功地構建了上述2個雞品種成纖維細胞庫，根據(jù)建庫要求對所建細胞系進行生物學分析，大骨雞和青殼蛋雞兩個品種的凍存樣本含量為各19個個體和9個個體，凍存管數(shù)是91支和42支，每個個體的凍存管數(shù)為4支以上，每支凍存管的細胞數(shù)量為2～3x106個細胞/ml.試驗結果如下： 1.培養(yǎng)細胞形態(tài)為典型的成纖維狀，為梭形或不規(guī)則三角形，細胞在

2、生長時呈放射狀、火焰狀或旋渦狀走形。通過顯微鏡可觀察到，不同種類、不同品種間細胞形態(tài)存在差異。 2.生長曲線結果顯示，所培養(yǎng)細胞在體外的生長增殖過程中呈“S”型，經歷了潛伏期、指數(shù)增生期和平頂期三個階段，符合細胞在體外生長的一般規(guī)律。 3.細胞凍存前后存活率結果表明，細胞復蘇后活率較凍存前有所下降，這表明細胞在冷凍、復蘇過程中可能受到一定的損傷。但活率均在90％以上。貼壁后的細胞與凍存前相比，細胞類型更純，完全為成纖維細

3、胞，傳代后細胞生長速度與凍存前基本一致。 4.在對所建細胞系進行微生物檢測時，我們對細胞污染中常見的細菌、真菌、病毒及支原體污染進行分析，結果均為陰性，表明培養(yǎng)物未受到細菌、真菌、病毒及支原體的污染。 5.染色體分析得出：大骨雞與青殼蛋雞二倍體染色體數(shù)目2n=78，未見異常，遺傳性能穩(wěn)定，不存在種間的交叉污染。通過對染色體的核型分析，可進行物種的鑒定。 6.實驗證明，lipofectin能有效介導重組質粒pECF

4、P～N1轉染成纖維細胞，轉染率與細胞生長匯合程度、脂質體包被質粒的濃度比例及轉染時間相關。當細胞匯合度達50～60％時，用4μl脂質體介導2μg重組質粒轉染10h即可獲得較滿意的轉染效率。轉染率分別為大骨雞28％，本青殼蛋雞32％。7.同工酶分析已被廣泛的應用于物種分析，因此本實驗對所建細胞系進行了乳酸脫氫酶(LDH)與蘋果酸脫氫酶(MDH)的酶譜分析，表明不同物種各呈現(xiàn)其獨特的條帶，具有種屬特異性。通過比較研究，得出細胞系之間不存在交