GGYJ含藥血清對HSC-T6細(xì)胞增殖、TGF-β1分泌以及ECM降解作用的研究.pdf

1、目的：觀察廣西桂郁金(GGYJ)含藥血清對大鼠HSC-T6細(xì)胞增殖、HSC-T6細(xì)胞自身轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的分泌、以及對轉(zhuǎn)化生長因子β1Ⅰ型受體（Tβ-RⅠ）、轉(zhuǎn)化生長因子β1Ⅱ型受體（Tβ-RⅡ）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMPs-13）、al(Ⅰ)膠原（aI-collagen） mRNA表達(dá)的影響，探討GGYJ抗肝纖維化作用的分子機(jī)制。
　　方法：選擇大鼠HSC-T6細(xì)胞

2、株，分為高、中、低三個給藥組（相當(dāng)于成人每日用量的20倍、10倍、5倍），以及空白組和陰性組共5組，均取用5％、10%、20%三種濃度的含藥血清，同時作用HSC-T6細(xì)胞24h、48h、72h后，以四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測GGYJ含藥血清對HSC-T6細(xì)胞生長增殖的抑制作用；用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測 GGYJ含藥血清對HSC-T6細(xì)胞自身分泌TGF-β1表達(dá)的影響；以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測分析GGYJ

3、含藥血清作用HSC-T6細(xì)胞后，其Tβ-RⅠ、Tβ-RⅡ、TIMP-1、MMPs-13、aI-collagen mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：⑴ MTT檢測結(jié)果：結(jié)果顯示，正常大鼠血清能明顯加速HSC-T6細(xì)胞的增殖，其抑制率隨含藥血清濃度的增加而降低，但無顯著性差異。抑制率與含藥血清作用時間不完全呈正相關(guān)性，其最好的作用濃度為10%，作用時間為48h。
　?、艵LISA檢測結(jié)果：各含藥血清組與正常大鼠血清組（空白血清組）

4、比較，對TGF-β1無明顯抑制作用；正常大鼠血清組與未加大鼠血清組（陰性組）比較，TGF-β1含量有顯著的增加（P＜0.01）。
　?、荝T-PCR檢測結(jié)果：各目的基因的空白組相對表達(dá)量（目的基因光密度與β-actin的比值）與陰性組的比較，均有顯著增加；其中 Tβ-RⅠ各給藥組的相對表達(dá)量與空白組比較有抑制作用（P＜0.01），但各處理組之間無顯著性差異；Tβ-RⅡ給藥組與空白組比較無明顯抑制作用，各處理組之間無顯著性差異；TI

5、MP-1給藥組與空白組比較有抑制作用（P＜0.01），各處理組之間有顯著差異（P＜0.01）；MMPs-13給藥組與空白組比較有增加作用（P＜0.05），各處理組之間無顯著性差異；aI-collagen給藥組與空白組比較有抑制作用（P＜0.01），各處理組之間有顯著差異（P＜0.01）。
　　結(jié)論：體外實驗中，GGYJ含藥血清對HSC-T6細(xì)胞株的增殖有抑制作用；對 HSC-T6細(xì)胞自身分泌的TGF-β1無明顯抑制作用；對 Tβ-