益骨膠囊含藥血清對成骨細(xì)胞增殖及分泌IL-1β、TGF-β1的影響.pdf

1、　　目的：觀察益骨膠囊含藥血清①對體外培養(yǎng)SD大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響,②對體外培養(yǎng)SD大鼠成骨細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的影響,以探討該方防治骨質(zhì)疏松可能的作用機(jī)制。 方法：①益骨膠囊藥液的制備：取淫羊藿、當(dāng)歸等8味免煎顆粒,以蒸餾水浸泡,使充分溶化后,經(jīng)過濾、離心,加95%乙醇等處理,再濃縮后備用。②益骨膠囊含藥血清的制備：選用12月齡雌性SD大鼠40只,隨機(jī)分為4組：高、中、低劑量給

2、藥組和生理鹽水組,每組10只；用灌胃法給服益骨膠囊藥液或生理鹽水,每天1次,連續(xù)灌胃12天,在末次灌胃后1.5小時(shí),無菌條件下右心室取血,離心后血清56℃、30min滅活,-70℃保存?zhèn)溆?。③?shí)驗(yàn)分組：采用二次酶消化法從新生SD大鼠顱骨獲取成骨細(xì)胞,傳代培養(yǎng),取第3代成骨細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?建立益骨膠囊含藥血清與成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,分為2組：含藥血清組和空白血清對照組(終濃度均為25%),每組16個(gè)孔,其中8孔培養(yǎng)24小時(shí)、8孔培養(yǎng)36小

3、時(shí)后,測定IL-1β和TGF-β1的含量。檢測成骨細(xì)胞細(xì)胞周期,取第5代成骨細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?分組同上,每組4瓶,其中2瓶培養(yǎng)24小時(shí)、2瓶培養(yǎng)36小時(shí)后,測定細(xì)胞周期。④檢測方法：采用ELISA法測定IL-1β、TGF-β1的含量,流式細(xì)胞儀技術(shù)測定成骨細(xì)胞細(xì)胞周期。⑤數(shù)據(jù)處理方法：數(shù)據(jù)結(jié)果以x±s表示,使用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,和對照組比較用t檢驗(yàn)。 結(jié)果：①益骨膠囊含藥血清對成骨細(xì)胞細(xì)胞周期的影響：含藥血清

4、組在24小時(shí)及36小時(shí)G0/G1期細(xì)胞比率(分別為61.61±1.27%,61.54±3.97%)均顯著低于空白血清組(P<0.01)；含藥血清組在24小時(shí)及36小時(shí)S期細(xì)胞比率(分別為19.71±1.48%,23.27±0.50%)、細(xì)胞增殖指數(shù)(分別為31.66±1.46%,32.57±2.97%)、G2/M期細(xì)胞比率(分別為8.85±0.15%,6.41±1.60%)均顯著高于空白血清組(P<0.05)。②益骨膠囊含藥血清對成骨細(xì)

5、胞分泌IL-1β的影響：含藥血清組在24小時(shí)及36小時(shí)分泌IL-1β的量(分別為14.83±1.96 pg/ml,11.31±2.06 pg/ml)明顯低于空白血清組(P<0.01)。③益骨膠囊含藥血清對成骨細(xì)胞分泌TGF-β1的影響：含藥血清組在24小時(shí)及36小時(shí)分泌TGF-β1的量(分別為367.88±34.41 pg/ml,469.50±26.30 pg/ml)均明顯高于空白血清組(P<0.01)。含藥血清組在36小時(shí)TGF-暨南