siRNA抑制Survivin基因?qū)Υ笫蟾涡菭罴?xì)胞HSC-T6凋亡的影響.pdf

1、目的：利用小分子RNA（siRNA）干擾技術(shù)，抑制survivin基因的表達(dá)，研究其對(duì)HSC-T6細(xì)胞株凋亡的影響及可能的機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為空白組、陰性對(duì)照組（pGPU6/GFP/Neo-shNC）、siRNA組（pGPU6/GFP/Neo-siRNA）。脂質(zhì)體介導(dǎo)survivin siRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞24小時(shí)后,倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。Survivin siRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞48小時(shí)后，利用RT-

2、PCR、western-blot檢測(cè)survivin mRNA及蛋白表達(dá)的改變,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，PI單染流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率，western-blot檢測(cè)caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：survivin siRNA轉(zhuǎn)染HSC24小時(shí)后，于倒置熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)：siRNA組細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)到清晰的綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率均達(dá)到75％；轉(zhuǎn)染作用48小時(shí)后,RT-PCR及werstern-blot結(jié)果顯示：空白組

3、、pGPU6/GFP/Neo-shNC組survivin mRNA及蛋白表達(dá)最豐富，pGPU6/GFP/Neo-siRNA組survivin mRNA及蛋白表達(dá)較少，空白組與pGPU6/GFP/Neo-shNC組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；空白組、pGPU6/GFP/Neo-shNC組與pGPU6/GFP/Neo-siRNA組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)pGPU6/GFP/Neo-siRNA組細(xì)胞

4、凋亡明顯；PI單染流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：與空白組、pGPU6/GFP/Neo-shNC組比較，pGPU6/GFP/Neo-siRNA組細(xì)胞凋亡率明顯提高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；空白組與pGPU6/GFP/Neo-shNC組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。werstern-blot結(jié)果顯示：空白組、pGPU6/GFP/Neo-shNC組caspase-3蛋白表達(dá)較少，pGPU6/GFP/Neo-siRNA組caspase-3蛋白