siRNA抑制Survivin基因?qū)Υ笫蟾涡菭罴毎鸋SC-T6凋亡的影響.pdf

1、目的：利用小分子RNA（siRNA）干擾技術，抑制survivin基因的表達，研究其對HSC-T6細胞株凋亡的影響及可能的機制。
　　方法：實驗分為空白組、陰性對照組（pGPU6/GFP/Neo-shNC）、siRNA組（pGPU6/GFP/Neo-siRNA）。脂質(zhì)體介導survivin siRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細胞24小時后,倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。Survivin siRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細胞48小時后，利用RT-

2、PCR、western-blot檢測survivin mRNA及蛋白表達的改變,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學的改變，PI單染流式細胞儀測定細胞凋亡率，western-blot檢測caspase-3蛋白的表達。
　　結(jié)果：survivin siRNA轉(zhuǎn)染HSC24小時后，于倒置熒光顯微鏡下觀察可見：siRNA組細胞內(nèi)可見到清晰的綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率均達到75％；轉(zhuǎn)染作用48小時后,RT-PCR及werstern-blot結(jié)果顯示：空白組

3、、pGPU6/GFP/Neo-shNC組survivin mRNA及蛋白表達最豐富，pGPU6/GFP/Neo-siRNA組survivin mRNA及蛋白表達較少，空白組與pGPU6/GFP/Neo-shNC組比較，無統(tǒng)計學意義（p>0.05）；空白組、pGPU6/GFP/Neo-shNC組與pGPU6/GFP/Neo-siRNA組比較，有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)pGPU6/GFP/Neo-siRNA組細胞

4、凋亡明顯；PI單染流式細胞儀檢測顯示：與空白組、pGPU6/GFP/Neo-shNC組比較，pGPU6/GFP/Neo-siRNA組細胞凋亡率明顯提高，有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；空白組與pGPU6/GFP/Neo-shNC組比較，無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。werstern-blot結(jié)果顯示：空白組、pGPU6/GFP/Neo-shNC組caspase-3蛋白表達較少，pGPU6/GFP/Neo-siRNA組caspase-3蛋白