大鼠急性心肌梗死后心肌細胞增殖和再生的實驗研究.pdf

1、目的：觀察大鼠急性心肌梗死后不同缺血時段和心臟不同部位心肌細胞的增殖變化;探討年齡因素對急性心肌梗死后心肌細胞增殖和再生的影響;評估急性心肌梗死后心肌細胞凋亡情況;并分析心肌梗死后新生的心肌細胞在損傷心肌中可能的修復作用。
　　方法：1.青年和老年大鼠均隨機各分為兩組，采用經(jīng)口氣管插管后開胸結扎冠狀動脈前降支的方法制成大鼠急性心肌梗死模型，對照組開胸置縫線而不結扎。2.分別于結扎冠狀動脈前降支后的第1、3、5、7、10、14、30

2、及60天處死大鼠，采集各部位心肌組織標本。于處死前24和12小時分別給予腹腔注射5-溴-2-脫氧尿苷(Brdu)，50mg/kg體重。3.采集的左室梗死區(qū)及右室非梗死區(qū)心肌標本，行蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察/分析心肌組織病理變化;并用免疫組織化學方法檢測Brdu陽性細胞在左室梗死邊緣區(qū)及右室非梗死區(qū)的表達情況;免疫熒光法測定Brdu和c-kit陽性的心肌細胞;α-sarcomeric actin抗體檢測增殖的細胞是否為心肌細胞;原位

3、末端標記法(TUNEL)檢測急性心肌梗死后心肌細胞凋亡指數(shù)(AI)。
　　結果：1.青年大鼠組急性心肌梗死后第5天梗死邊緣區(qū)和非梗死區(qū)Brdu陽性心肌細胞明顯增多(p＜0.05);第7天梗死邊緣區(qū)Brdu陽性心肌細胞達高峰，為對照組的5.7倍[（1.26±0.15）％比(0.22±0.06)％，p＜0.05]，非梗死區(qū)為對照組的4.2倍[(0.75±0.12)％比（0.18±0.07）％，p＜0.05];第60天兩組則無顯著差別。

4、實驗組第7天梗死邊緣區(qū)的Brdu陽性細胞數(shù)量為右室非梗死區(qū)的1.7倍(p＜0.05)，第14天為1.4倍(p＜0.05)。
　　2.老年大鼠急性心肌梗死后第5天梗死邊緣區(qū)和非梗死區(qū)Brdu陽性心肌細胞較青年組明顯增多(p＜0.05)。梗死后第7天，老年大鼠梗死邊緣區(qū)和非梗死區(qū)Brdu陽性率分別為青年組的2.1倍[（2.63±0.12）％比（1.26±0.15）％，P＜0.05]、2.4倍[（1.82±0.57）％比（0.75±0.

5、12）％，P＜0.05]。梗死第30天時，梗死邊緣區(qū)和非梗死區(qū)兩年齡組之間均已無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)。
　　3.凋亡檢測結果顯示老年大鼠梗死第1天邊緣區(qū)和非梗死區(qū)凋亡指數(shù)分別為青年組的1.35倍[（41.7±1.6）％比（30.9±3.8）％，p＜0.05]、1.43倍[（26.3±1.6）％比（18.4±3.3）％，P＜0.05];第30天時兩年齡組之間凋亡指數(shù)無統(tǒng)計學差異。
　　4.免疫熒光檢測顯示部分Brdu陽性

6、細胞心肌肌動蛋白標記陽性;梗死邊緣區(qū)部分Brdu陽性細胞c-kit標記亦陽性，這些細胞核形態(tài)較小且圓。
　　結論：1.急性心肌梗死后，大鼠新生心肌細胞明顯增多，梗死邊緣區(qū)及右室非梗死區(qū)均顯著高于對照組，實驗組梗死邊緣區(qū)的心肌細胞增殖/再生又較右室非梗死區(qū)更為明顯;增殖/再生現(xiàn)象呈時間依賴性。
　　2.老年大鼠心肌梗死后新生心肌細胞比例高于青年大鼠;梗死后心肌細胞凋亡數(shù)量也高于青年組。
　　3.年齡能增加心肌細胞對缺血損