OX40-OX40L共刺激通路介導嗜堿性粒細胞始動過敏性氣道炎癥的研究.pdf

1、背景:
　　支氣管哮喘是以Th2免疫應答為主的慢性過敏性氣道炎癥。近年研究發(fā)現(xiàn)嗜堿性粒細胞在不同疾病模型中能夠誘發(fā)Th2免疫應答，但其具體機制目前尚不清楚。OX40-OX40L共刺激通路在Th細胞分化及哮喘中均發(fā)揮重要作用。
　　目的:
　　通過體內(nèi)外研究闡釋并明確嗜堿性粒細胞始動過敏性氣道炎癥的作用，在此基礎上進一步探討嗜堿性粒細胞啟動Th2免疫反應誘發(fā)過敏性氣道炎癥的信號分子機制。
　　方法:
　　1.

2、利用OVA免疫小鼠建立哮喘氣道炎癥模型，觀察在哮喘炎癥早期小鼠縱隔淋巴結(jié)(Mediastinal lymph nodes，MLN)中嗜堿性粒細胞、樹突狀細胞(Dendritic cells，DCs)和Th2細胞的時間變化曲線和嗜堿性粒細胞表面分子表達的變化。
　　2.建立IL-3誘導小鼠骨髓細胞定向分化為嗜堿性粒細胞的體外培養(yǎng)體系;流式細胞儀分選嗜堿性粒細胞并鑒定。在此基礎上觀察髓源性嗜堿性粒細胞(Bonemarrow-deriv

3、ed basophils，BM-Bas) OX40和OX40L表達特點。
　　3.建立體外嗜堿性粒細胞誘導Th2細胞分化體系，在此基礎上采用OX40L封閉性抗體（抗小鼠CD252抗體）或者OX40-/-小鼠na(i)ve T細胞，觀察在OX40-OX40L共刺激通路阻斷條件下對嗜堿性粒細胞誘導Th2細胞分化的影響。
　　4.利用OVA致敏、激發(fā)C57BL/6小鼠構(gòu)建哮喘模型，在此基礎上在致敏階段尾靜脈注射OX40L阻斷性抗體

4、（抗小鼠CD252抗體），觀察氣道病理組織學改變、血清OVA特異性IgE（Ovalbumin-special immunoglobulin E，OVA-sIgE）、支氣管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid, BALF)中嗜酸性粒細胞數(shù)量和BALF中Th2型細胞因子IL-4、IL-5和IL-13的變化。
　　5.建立體外過繼性回輸MLN嗜堿性粒細胞誘發(fā)小鼠哮喘模型，觀察阻斷OX40-OX40L

5、共刺激通路后受體小鼠MLN Th2細胞比例變化及氣道病理組織學、血清OVA-sIgE、BALF中嗜酸性粒細胞數(shù)量和Th2型細胞因子IL-4、IL-5和IL-13的變化。
　　結(jié)果:
　　1.在哮喘炎癥早期，MLN中嗜堿性粒細胞數(shù)目顯著增加，而DCs無明顯變化，并且嗜堿性粒細胞數(shù)達到峰值時間早于Th2細胞。同時嗜堿性粒細胞表面OX40L信號分子變化最為顯著。
　　2.體外IL-3誘導BM-Bas并受DNP-OVA和抗DN

6、P-IgE復合物刺激后誘導性表達OX40L。
　　3.體外阻斷OX40-OX40L共刺激通路減少嗜堿性粒細胞誘導Th2細胞分化比例。
　　4.致敏階段抗小鼠CD252抗體阻斷OX40-OX40L共刺激通路降低哮喘小鼠血清OVA-sIgE、減少BALF中嗜酸性粒細胞數(shù)量、降低BALF中IL-4、IL5和IL-13水平，減輕肺組織過敏性氣道炎癥。
　　5.體外過繼性回輸MLN嗜堿性粒細胞啟動Th2免疫應答誘發(fā)小鼠哮喘炎癥，

7、而OX40-/-受體小鼠和回輸OX40L處理的嗜堿性粒細胞的WT C57BL/6受體小鼠MLN中Th2細胞比例降低，肺部過敏性氣道炎癥減輕。
　　結(jié)論:
　　1.嗜堿性粒細胞早期參與始動過敏性氣道炎癥。
　　2.嗜堿性粒細胞在體內(nèi)外誘導性表達OX40L。
　　3.OX40-OX40L共刺激通路介導嗜堿性粒細胞誘導Th2細胞分化。
　　4.在OVA誘導的過敏性氣道炎癥中，OX40-OX40L共刺激通路介導嗜堿