體內(nèi)組織工程骨骨相關(guān)基因表達(dá)的研究.pdf

1、具有特定化學(xué)組成和物理形貌的HA/β-TCP陶瓷因具有良好的骨誘導(dǎo)活性，常被用作體內(nèi)骨組織工程的支架材料。在組織形態(tài)學(xué)水平，HA/β-TCP陶瓷誘導(dǎo)形成的體內(nèi)組織工程骨與自然再生骨相似，但有關(guān)體內(nèi)組織工程骨在基因表達(dá)水平的研究甚少。理想的體內(nèi)組織工程骨應(yīng)該與自然再生骨具有類似的時(shí)序性基因表達(dá)。I型膠原、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白及骨形態(tài)發(fā)生蛋白4是重要的骨相關(guān)基因，它們的正確表達(dá)對新骨形成非常重要。本研究對HA/β-TCP陶瓷構(gòu)建的體內(nèi)組織工

2、程骨中的骨相關(guān)基因-I型膠原、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白及骨形態(tài)發(fā)生蛋白4進(jìn)行mRNA或蛋白水平的定量分析，并與自然再生骨比較，從基因和蛋白水平評價(jià)體內(nèi)組織工程骨，為其應(yīng)用提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)分二部分。 第一部分：體內(nèi)組織工程骨和自然再生骨模型的構(gòu)建。制備①5mm×8mm的磷酸鈣陶瓷36粒并分別植入6只狗的豎直肌內(nèi)，同時(shí)，在狗的下頜骨部位形成自然再生骨模型。術(shù)后1、2、4、8、12及24周，取出體內(nèi)組織工程骨及自然再

3、生骨，大體觀察。 第二部分：體內(nèi)組織工程骨骨相關(guān)基因mRNA和蛋白水平的檢測。在各檢測時(shí)間點(diǎn)，取3粒由磷酸鈣陶瓷構(gòu)建的體內(nèi)組織工程骨及一半自然再生骨，提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，用實(shí)時(shí)相對定量PCR的方法檢測I型膠原、堿性磷酸酶和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4 mRNA的表達(dá)。取兩種骨組織在1、2、4、8及24周的剩余標(biāo)本，用考馬斯亮蘭微板法對標(biāo)本中的微量蛋白定量(mg/ml)，再分別采用IFCC推薦法和ELISA測堿性磷酸酶活力(U

4、/ml)及骨鈣蛋白含量(nmol/ml)，并分別換算成U/mg及nmol/mg。 結(jié)果表明： (1)工型膠原、堿性磷酸酶和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4 mRNA及堿性磷酸酶活力和骨鈣蛋白在體內(nèi)組織工程骨和自然再生骨中都持續(xù)表達(dá)。其表達(dá)程度不同，但表達(dá)趨勢相似。 (2)mRNA水平，工型膠原和堿性磷酸酶在體內(nèi)組織工程骨中表達(dá)峰值時(shí)間較自然再生骨的出現(xiàn)晚，且表達(dá)量少；而骨形態(tài)發(fā)生蛋白4在體內(nèi)組織工程骨中的表達(dá)一直維持在比自然再生