骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨相關(guān)分子的基因及蛋白表達(dá)研究.pdf

1、第一部分：骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨相關(guān)分子的基因表達(dá)與臨床相關(guān)性研究。
　　 目的：通過分析骨性關(guān)節(jié)炎與股骨頸骨折患者的關(guān)節(jié)軟骨IL-1β，NFAT1，NFAT1B，TNFα，COL2A1，COL10A1，Aggrecan等分子的基因表達(dá)，尋找與OA病理過程相關(guān)的分子，從而為OA的治療提供新的途徑。
　　 方法：收集因骨性關(guān)節(jié)炎和股骨頸骨折而行全髖全膝關(guān)節(jié)置換或半髖置換的患者46例，取深部軟骨組織1.2g，保存于RNAL，ATE

2、R（Ambion）中，直到mRNA抽提（保存時(shí)間小于一周）。
　　 按Rneasy Fibrous Tissue Midi Kit（Qiagen，guangDong，China）試劑盒所述步驟抽提關(guān)節(jié)軟骨中總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara）逆轉(zhuǎn)錄為cDNA（10μl體系），-20℃保存cDNA直到行PCR反應(yīng)。實(shí)時(shí)定量PCR儀測定骨性關(guān)節(jié)炎與股骨頸骨折患者關(guān)節(jié)軟骨中IL-1β，NFAT1，NFAT1B，TNFα，COL2A

3、1，COL10A1及Aggrecan等分子的基因相對表達(dá)量，用2-△△分析結(jié)果。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析股骨頸骨折和骨性關(guān)節(jié)炎患者、髖關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎和膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎、膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎不同階段的相關(guān)分子基因表達(dá)差別與臨床的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：骨性關(guān)節(jié)炎患者IL-1β，NFAT1，NFAT1B，TNFα，COL2A1，COL10A1表達(dá)高于股骨頸骨折患者（P<0.05）。而Aggrecan表達(dá)骨性關(guān)節(jié)炎患者與股骨頸骨折患者無顯著性差異（P>0

4、.05）。髖關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎IL-1β，NFAT1，NFAT1B，TNFα，COL2A1，COL10A1和Aggrecan表達(dá)無顯著性差異（P>0.05）。膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎在不同階段基因表達(dá)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)軟骨中IL-1β，NFAT1，NFAT1B，TNFα，COL2A1，COL10A1等分子的基因表達(dá)水平較股骨頸骨折升高，提示這些分子在OA的病理過程中參與了重要

5、作用。
　　 第二部分：骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨Col2A1和TNFα蛋白表達(dá)與臨床相關(guān)性研究。
　　 目的：比較骨性關(guān)節(jié)炎與股骨頸骨折患者的關(guān)節(jié)軟骨分子的蛋白表達(dá)差異，初步研究骨性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨退變相關(guān)因素，為OA治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：收集因髖關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎和股骨頸骨折而行全髖或半髖置換的患者18例，取深部軟骨組織，蛋白抽提液抽提總蛋白，保存于-80℃?zhèn)溆谩２捎锰禺愋钥筎NF-α，COL2A1-抗及二抗抗體，