不同藥物對(duì)小鼠葡聚糖硫酸鈉結(jié)腸炎療效觀察及瘦素與潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病關(guān)系初探.pdf

1、研究背景：炎癥性腸病(IBD)在我國(guó)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，由于其確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，使本病的預(yù)防和治療存在很多難點(diǎn)。為此，研究者制備了多種IBD動(dòng)物模型用于該病的研究。其中，葡聚糖硫酸鈉(DSS)模型因成功率高、重復(fù)性好、與人類潰瘍性結(jié)腸炎(UC)病變相似的優(yōu)點(diǎn)被廣泛用于UC病理、發(fā)病機(jī)制和治療藥物開發(fā)的研究。通過對(duì)IBD動(dòng)物模型和患者的研究證實(shí)，環(huán)氧化酶-2(COX-2)參與IBD發(fā)病并與疾病活動(dòng)性密切相關(guān)。關(guān)于COX-2抑制劑用于IB

2、D治療效果在部分動(dòng)物模型中得出兩種截然相反的結(jié)果，還需要在不同的動(dòng)物模型中進(jìn)行更多更深入研究以明確。近來有研究提示，調(diào)節(jié)脂肪代謝的瘦素(Lp)參與炎癥過程，瘦素基因缺失小鼠對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎有抵抗性。關(guān)于Lp與IBD發(fā)病關(guān)系及確切機(jī)制還需進(jìn)一步探討。在IBD治療方面，中藥有其獨(dú)到之處并已廣泛用于臨床，關(guān)于中藥制劑治療IBD機(jī)制目前尚無用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法系統(tǒng)研究的報(bào)道。 研究目的：1.觀察選擇性COX-2抑制劑對(duì)小鼠DSS結(jié)腸炎療效。

3、 2.觀察中藥制劑對(duì)小鼠DSS結(jié)腸炎療效并探討其作用機(jī)制。 3.初步探討Lp在IBD發(fā)病中的作用。 材料與方法：8周齡(20±2g)雄性BALB/c小鼠予5％DSS自由飲用7天制成類似人類潰瘍性結(jié)腸炎的小鼠DSS結(jié)腸炎模型。小鼠(n=125)隨機(jī)分為4組。1、空白對(duì)照組(n=5)；2、DSS飲用同時(shí)給藥組，根據(jù)不同藥物又分5組：①DSS+蒸餾水對(duì)照組(n=10)；②COX-2抑制劑組(n=12)，予西樂葆50mg/K

4、g/日灌胃；③5-ASA組(n=10)，予頗得斯安1g/Kg/日灌胃；④中藥制劑(奇力生)組(n=11)，奇力生灌胃0.1ml/日/次，同時(shí)飼料中給藥，總量約0.4ml/日；⑤Lp組(n=8)，予重組小鼠Lp1微克/g/日腹腔注射。3、建模后給藥組：分為①蒸餾水對(duì)照組(n=7)；②COX-2抑制劑組(n=8)；③5-ASA組(n=8)；④中藥制劑組(n=8)；⑤Lp組(n=8)。各組動(dòng)物給5％DSS自由飲用7天后停藥分別予蒸餾水、西樂葆

5、、頗得斯安、中藥制劑、重組小鼠Lp5天，劑量、用法同上。4、提前給藥組：又分為①DSS對(duì)照組(n=10)，②COX-2抑制劑組(n=10)，③5-ASA組(n=10)，④中藥制劑組(n=10)。分別予蒸餾水、西樂葆、頗得斯安、中藥制劑5天后同時(shí)加用5％DSS自由飲用7天。 從五方面評(píng)價(jià)各組：(1)一般情況包括體重、結(jié)腸長(zhǎng)度、大體評(píng)分；(2)組織學(xué)評(píng)分；(3)化學(xué)比色法檢測(cè)病變結(jié)腸組織髓過氧化物酶(MPO)活性；(4)免疫組織化學(xué)

6、方法檢測(cè)COX-2及NF-κB活性；(5)酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測(cè)血清Lp水平。 結(jié)果1、選擇性COX-2抑制劑制模后給予COX-2抑制劑組小鼠在體重下降、大體評(píng)分、組織學(xué)評(píng)分方面較制模后DDW對(duì)照組顯著改善(治療14.91±7.44vsDDW26.91±6.07，治療3.13±1.48vsDDW7.93±2.32，治療8.25±2.80vsDDW10.50±1.25，p=0.011，0.003，0.042)。

7、同時(shí)及提前給予COX-2抑制劑治療組動(dòng)物結(jié)腸病變較DSS對(duì)照組改善尤其以提前給藥組明顯，療效同制模后給藥。 2、中藥制劑同時(shí)、制模后及提前給予中藥制劑(奇力生)均可在大體評(píng)分、病理學(xué)評(píng)分、MPO方面改善DSS結(jié)腸炎。 3、相關(guān)機(jī)制的研究通過免疫組化檢測(cè)各組動(dòng)物結(jié)腸組織COX-2與NF-κB蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)：COX-2與NF-κB在正常結(jié)腸不表達(dá)，DSS誘發(fā)的結(jié)腸炎中二者活性明顯增高且與結(jié)腸長(zhǎng)度、大體評(píng)分及組織學(xué)評(píng)分有明顯相關(guān)

8、。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)COX-2與NF-κB有顯著相關(guān)關(guān)系(p=0.00)。 4、重組小鼠瘦素制模后給予重組Lp組在結(jié)腸長(zhǎng)度、大體評(píng)分及MPO活性方面較制模后蒸餾水對(duì)照組為重(Lp組5.95±0.21vsDDW6.69±0.80，Lp組10.31±0.53vsDDW7.93±2.32，Lp組1.61±0.17vsDDW1.04±0.31，p=0.040，0.016，0.011)。同時(shí)給予Lp處理的小鼠結(jié)腸MPO活性高于DSS模型組。

9、 5、采用ELISA方法檢測(cè)DSS結(jié)腸炎及不同時(shí)間給予不同藥物各組動(dòng)物血清Lp水平，測(cè)得的Lp水平波動(dòng)很大，與各炎性指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。 結(jié)論1、選擇性COX-2抑制劑對(duì)小鼠DSS結(jié)腸炎有治療作用。 2、中藥制劑(奇力生)通過下調(diào)COX-2、NF-κB表達(dá)明顯改善DSS結(jié)腸炎病變。 3、正常結(jié)腸COX-2、NF-κB不表達(dá)，小鼠DSS結(jié)腸炎時(shí)表達(dá)明顯增高且與炎癥病變程度相關(guān)。COX-2、NF-κB表達(dá)呈正相關(guān)