口服乳果糖抑制葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥.pdf

1、目的：研究口服乳果糖對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥的抑制作用
　　 方法：一、建立動(dòng)物模型：雄性BABLB/C小鼠(20-24g，8-12周齡雄性小鼠，6只為一組)，隨機(jī)分配的7個(gè)組間進(jìn)行：正常動(dòng)物組飲用常規(guī)水，腹膜腔注射氫氣水組(15ml/kg)，DSS處理組，乳果糖處理組(1000,2000,and3000mg/kg)三個(gè)組，乳果糖(3000mg/kg)加上甲硝唑(200mg/kg)，頭孢拉定(100mg/kg)處理組。除正常

2、組外，其余組小鼠飲用含有硫酸葡聚糖鈉(DSS)的水，構(gòu)建潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型。
　　 二、氫分子富集水的制備：使用海軍醫(yī)學(xué)系制造的氫氣富集-生理鹽水制備裝置在高壓(0.4Mpa)下把氫氣溶解在生理鹽水下6小時(shí)，到達(dá)一個(gè)過(guò)飽和的水平。飽和的氫氣鹽水儲(chǔ)存在4°大氣壓下的無(wú)死隙鋁袋中。氫氣富集的鹽水通過(guò)伽馬射線輻射滅菌，每周新鮮配制，這樣確保濃度一直維持在0.6mm/l。
　　 三、組織病理學(xué)觀察：橫結(jié)腸的遠(yuǎn)端部位制切片，HE

3、染色后鏡下檢查，結(jié)腸損傷和壞死是通過(guò)炎癥的嚴(yán)重程度和結(jié)腸隱窩再生和受損的程度來(lái)進(jìn)行評(píng)估的，結(jié)腸整體長(zhǎng)度。
　　 四、炎癥因子相關(guān)數(shù)據(jù)檢測(cè)：TNF-a和IL-1b的濃度測(cè)定：收集結(jié)腸組織，在鹽水中清洗，然后在冰上用1ml正常的鹽水(4°)快速勻漿，ELISA試劑盒測(cè)定TNF-a和IL-1b的濃度。吸光值在酶標(biāo)儀中測(cè)定，濃度值依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算得到。樣品中的蛋白含量通過(guò)考馬斯亮藍(lán)分析得到，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用每微克蛋白來(lái)校正。MDA與MPO濃度

4、的測(cè)定：通過(guò)化學(xué)方法來(lái)測(cè)定，詳細(xì)方法參考廠家的使用說(shuō)明，結(jié)腸組織(100mg，濕重)在2ml10M磷酸鹽(ph7.4)溶液中勻漿。12000g離心20min后，上清中的MDA和MPO含量使用相應(yīng)的試劑盒測(cè)定。
　　 五、結(jié)腸炎評(píng)分依據(jù)：1.體重變化：體重沒(méi)有減少定為0,體重減少1-5％定為1，5％-10％定為2，10％到20％定為3，超過(guò)20％定為4。
　　 2.糞便性狀：形態(tài)正常的顆粒狀定義為0,漿狀，半顆粒狀不能粘附

5、在肛門處的定義為2分，液態(tài)糞便不能粘附到肛門處為4分
　　 3.便血狀態(tài)：沒(méi)有血定義為0,隱血陽(yáng)性2分，膿血便為4分。所有這些評(píng)分加在一起然后除以三，結(jié)果總評(píng)分范圍在0(健康)和4(最大結(jié)腸炎活性)之間。
　　 結(jié)果：DSS誘發(fā)的病癥包括：體重下降，結(jié)腸炎評(píng)分增加，結(jié)腸長(zhǎng)度病理性變短，結(jié)腸損傷處TNF-α，IL-1β，MDA以及MPO水平的升高。但在乳果糖處理以及腹腔注射氫氣水后，上述病癥得到了顯著的抑制。通過(guò)抗生素去除