2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 探討p73基因在宮頸癌中是如何表達(dá)的,p73與人乳頭狀瘤病毒、巨細(xì)胞病毒感染有無相關(guān)性,以及兩種病毒負(fù)荷量與宮頸癌的關(guān)系,為進(jìn)一步研究宮頸癌的發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)。 材料和方法: (1)研究對象:均來自2004.4-2006.2山東大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院濟(jì)南市中心醫(yī)院婦科門診及2005.4-2006.2山東大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院齊魯醫(yī)院婦科門診。共100例。其中病例組70例,經(jīng)過陰道鏡下活檢、病理診斷證實(shí)的宮頸癌有38例(其

2、中鱗癌29例,腺癌9例,按病理分級G1、G2級18例,G3級20例,按FIGO分期Ⅰ期11例,Ⅱ期、Ⅲ期27例,按淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移,有轉(zhuǎn)移14例,無轉(zhuǎn)移24例,按浸潤深度,淺肌層22例,深肌層16例)、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)32例(CIN1有19例,CIN11、CIN111共有13例),均無其他內(nèi)科疾患。對照組30例,無慢性宮頸炎病史。對照組與病例組均取其宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行檢測。 (2)方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(FQ

3、-PCR)檢測宮頸脫落細(xì)胞人乳頭狀瘤病毒、巨細(xì)胞病毒;用免疫組織化學(xué)方法檢測p73蛋白在宮頸脫落細(xì)胞的表達(dá)情況。 FQ-PCR方法:兩種病毒均嚴(yán)格按試劑盒說明書的操作步驟進(jìn)行,先處理宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本,提取DNA,再稀釋定量標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行FQ-PCR擴(kuò)增。如果Ct值<30,則試驗(yàn)結(jié)果判為陽性。 免疫組織化學(xué)法:采用鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(SABC)法。由宮頸刷收集的宮頸脫落細(xì)胞離心及濃縮后涂片(玻片經(jīng)脫脂、防脫

4、處理)。按試劑盒說明書進(jìn)行操作。用已知陽性切片做陽性對照,PBS代替一抗作陰性對照。p73陽性表達(dá)細(xì)胞的細(xì)胞核呈棕黃色,隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野(X400),不足5個(gè)高倍視野者,計(jì)數(shù)脫落細(xì)胞中全部細(xì)胞數(shù)。陽性細(xì)胞<10定為陰性(一),陽性細(xì)胞≥10,定為陽性(+)。 結(jié)果: 1.PCR擴(kuò)增結(jié)果:38例宮頸癌,HPV16/18型在宮頸鱗癌、腺癌中陽性率分別為100﹪和66.67﹪,是有顯著性差異的(X2=6.41,P<0.05

5、。);而CMV在鱗癌、腺癌中陽性率分別為48.27﹪和44.44﹪,差異無顯著性。 32例CIN中HPV16/18型20例,陽性率62.50﹪,CMV7例,陽性率21.87﹪;30例正常宮頸HPV16/18型5例,陽性率16.67﹪,未檢出CMV陽性。 2.HPV16/18型、CMV兩種病毒感染的負(fù)荷量(用-X±s表示)比較:38例宮頸癌中HPV16/18型和CMV的平均拷貝數(shù)分別為28.98×106和2.83×106;

6、32例CIN中兩病毒平均拷貝數(shù)為9.63×106和0.09×106;30例正常宮頸HPV16/18型平均拷貝數(shù)為0.23×106;可見,兩種病毒的平均拷貝數(shù)均隨正常宮頸→CIN→宮頸癌而增加。 3.免疫組織化學(xué)結(jié)果:38例宮頸癌中p73陽性表達(dá)的共有26例,陽性率68.40﹪,與文獻(xiàn)報(bào)道一致。按病理分級,G1、G2級的陽性率44.44﹪,G3級的陽性率90.00﹪,X2=7.11,P<0.05??梢妏73陽性表達(dá)在不同病理分級中

7、是有顯著性差異的。而在其他各類分類方法中差異均無顯著性。32例CIN中p73陽性表達(dá)的共有8例,陽性率25.00﹪;30例正常宮頸p73陽性表達(dá)的只有1例,陽性率3.33﹪。 4.從總體上看,p73與HPV16/18型、CMV均隨正常宮頸→C1N→宮頸癌陽性率逐漸增高。但只有p73與HPV16/18型在此三組中的陽性表達(dá)是有顯著性差異的(P<0.05);而CMV陽性率在三組中無顯著性差異(P>0.05)。 5運(yùn)用四表格確

8、切概率法分別比較p73與兩種病毒的相關(guān)關(guān)系:p73與HPV16/18型均為陽性的有26例,均為陰性的有3例,X2=4.04,P<0.05,二者有相關(guān)性;p73與CMV均為陽性的有8例,均為陰性的有9例,X2=0.0004,P>0.05,無相關(guān)性。 結(jié)論: 1.HPV16/18型、CMV均與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),HPV16/18型在鱗癌中陽性率甚至達(dá)到100﹪,提示宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與HPV16/18型直接相關(guān),高危型H

9、PV是宮頸癌的主要致癌因素[4],但不是惟一致癌因素[5],單獨(dú)HPV尚不足以引起人正常鱗狀上皮細(xì)胞充分惡變.僅達(dá)到細(xì)胞轉(zhuǎn)化的“永生化”.即相當(dāng)于臨床的“癌前”階段,HPV感染的細(xì)胞發(fā)生惡變需要其它因子的協(xié)同作用[6]。CMV作為高危型HPV的協(xié)同因子,在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中也起著不可忽略的作用。 2.兩種病毒的負(fù)荷量隨宮頸病變程度的增高而增高,高負(fù)荷量提示病毒不斷復(fù)制[7],造成宮頸的持續(xù)感染。應(yīng)將病毒檢測作為宮頸癌篩查和診斷的

10、重要手段,以便及早發(fā)現(xiàn)病毒持續(xù)感染的高危人群。 3.p73高表達(dá)于宮頸癌中,低分化組明顯高于高分化組,而與組織類型、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度無關(guān),與Brooks[8]研究結(jié)果一致,提示宮頸癌組織確實(shí)存在p73蛋白,其過表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。Brooks認(rèn)為宮頸癌組織中p73基因表達(dá)增高的原因可能與p73沉默等位基因的表達(dá)激活有關(guān)。p73基因在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中可能不起抗癌基因作用,而是作為p53的模擬突變體在細(xì)胞內(nèi)模

11、擬p53分子的功能,從而使p53分子失效,促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。 4.p73與HPV16/18型有一定相關(guān)性表明二者之間存在著某些關(guān)聯(lián),似乎都在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著不可忽略的作用,究竟是HPV16/18型的持續(xù)感染導(dǎo)致了宮頸癌的發(fā)生,而宮頸癌的發(fā)展又導(dǎo)致了p73的高表達(dá);還是p73的高表達(dá)導(dǎo)致了HPV16/18型的持續(xù)感染,從而導(dǎo)致了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展呢?其相互作用機(jī)制并不明了??赡芤彩桥c宮頸癌中高危型HPVE6、E7癌蛋白有關(guān)。由

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