HCCR在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及其與HPV16-18感染的關(guān)系.pdf

1、宮頸癌(CC)是婦女最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，現(xiàn)已確認(rèn)高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)是宮頸癌形成最重要的危險(xiǎn)因子，99.7％的浸潤(rùn)性宮頸癌中可以檢測(cè)到HR-HPV的存在。因此，通過(guò)高危HPV的檢測(cè)來(lái)篩查易患人群，追蹤HPV感染狀態(tài)，隨訪HPV是否被清除，是預(yù)防宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵。但并非所有感染HPV的患者都會(huì)發(fā)展為宮頸癌，僅檢測(cè)到患者感染了HPV而不進(jìn)一步檢查就無(wú)法了解宮頸病變的程度和發(fā)展趨勢(shì)。人宮頸癌基因(HCCR，包括HCCR-1和H

2、CCR-2兩種)在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和宮頸癌中呈高表達(dá)，在正常對(duì)照組不表達(dá)，因此如果通過(guò)對(duì)宮頸癌病因?qū)W因素HPV和生物標(biāo)志物因素HCCR的聯(lián)合檢測(cè)，來(lái)對(duì)宮頸癌高危人群進(jìn)行篩查，可能具有重要意義。本研究對(duì)41例宮頸液基細(xì)胞殘液及相應(yīng)的組織學(xué)標(biāo)本應(yīng)用原位雜交法檢測(cè)HPV16/18，并用免疫組化法檢測(cè)HCCR，以探討二者在子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)意義及臨床應(yīng)用價(jià)值，試圖為提高宮頸癌易患人群檢出率，進(jìn)而為宮頸癌的預(yù)警和早期診斷提供更科學(xué)

3、有效的方法，達(dá)到早診早治，降低宮頸癌發(fā)病率死亡率的目的：并為開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便易得的分子篩查技術(shù)資源提供理論基礎(chǔ)。 材料和方法: 1、材料 (1)研究對(duì)象 570例宮頸液基細(xì)胞學(xué)殘液標(biāo)本，均經(jīng)LCT(Liquid-based Cytology Test，LCT系統(tǒng))診為宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌，來(lái)自2005年11月～2006年11月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科。年齡19～76歲，平均48.53歲。無(wú)宮頸手術(shù)史、未孕、

4、無(wú)盆腔放射治療史。本研究組取其中經(jīng)活檢或切除后具有相應(yīng)組織學(xué)標(biāo)本者31例，并隨機(jī)選取6例炎癥和4例正常標(biāo)本作為對(duì)照，年齡25～68歲，平均年齡46.7歲。其中宮頸癌組6例、CINⅡ/Ⅲ組14例、CINI組11例、炎癥組6例(包括形態(tài)學(xué)診為HPV感染和炎癥的病例)、正常對(duì)照組4例。細(xì)胞學(xué)分組以相應(yīng)組織學(xué)診斷為分組依據(jù)。 (2)主要試劑、儀器和來(lái)源HPV原位雜交試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。HCCR蛋白兔抗人多克隆抗體由韓國(guó)J

5、in Woo Kim教授惠贈(zèng)(本抗體是針對(duì)HCCR-1和HCCR-2相同C-末端氨基酸序列的多克隆抗體，具有較好的特異性)。DAB顯色試劑盒和免疫組化S-P試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。 2、方法 (1)免疫組織化學(xué)染色：用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶免疫組化法(S-P法)檢測(cè)HCCR的表達(dá)。結(jié)果判定：HCCR蛋白定位于胞漿，胞漿內(nèi)見(jiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。由3名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師在雙盲法下獨(dú)立計(jì)數(shù)。細(xì)胞涂片主要計(jì)數(shù)有病

6、變的細(xì)胞，異常宮頸上皮細(xì)胞著色大于10％則判定為陽(yáng)性標(biāo)本<'[5]>。細(xì)胞片和組織片在光鏡下根據(jù)著色范圍分為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10～24％為(+)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25～49％為(++)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50～74％為(+++)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于75％為(++++)。 (2)原位雜交：檢測(cè)HPVl6/18 DNA的表達(dá)。細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于25％為(+)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25％～49％為(++)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50％～74％為(+

7、++)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)75％～100％為(++++)。 (3)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：對(duì)所得結(jié)果各組間采用x<'2>檢驗(yàn)及Fisher's確切概率法檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；用Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢驗(yàn)：HPV16/18感染與HCCR表達(dá)的關(guān)系，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1、HCCR和HPV16/18在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中，隨著病變程度的加重而檢出率增高。 2、HCCR的表達(dá)和HPV16/18的