索拉非尼對大鼠ROP新生血管抑制作用的研究.pdf

1、目的：探討玻璃體腔注射索拉非尼對大鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（Oxygen-induced retinopathy，OIR）中視網(wǎng)膜新生血管的作用。為索拉非尼治療早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變提供理論依據(jù)。
　　方法：選取216只7日齡SPF級SD大鼠，隨機(jī)分為6組：A.正常對照組、B. ROP對照組、C. ROP+DMSO組、D. ROP+DMSO+5μg索拉非尼組、E. ROP+DMSO+20μg索拉非尼組、F. ROP+DMSO+80μg索拉非尼

2、組。A組一直在正常氧環(huán)境中飼養(yǎng)至17日，后五組建立氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變模型，分別置于氧濃度為（75±2）％的氧箱中飼養(yǎng)5天后取出再放于正?？諝庵酗曫B(yǎng)至第17天，P12乳鼠出氧箱，C組、D組、E組、F組分別左眼玻璃體腔注射5μL的DMSO和相應(yīng)濃度的索拉非尼溶液，P17時處死乳鼠，分別取視網(wǎng)膜組織做視網(wǎng)膜鋪片染色并觀察視網(wǎng)膜血管形態(tài)，做視網(wǎng)膜組織石蠟切片 HE染色觀察視網(wǎng)膜組織形態(tài)和突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量，石蠟切片行免疫組化染色檢測VE

3、GFR-2和PDGFR-β蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測新鮮視網(wǎng)膜中的VEGFR-2m RNA和PDGFR-βmRNA的含量。
　　結(jié)果從視網(wǎng)膜鋪片和石蠟切片HE染色均能觀察到各組視網(wǎng)膜血管的形態(tài)：A組視網(wǎng)膜血管從視盤發(fā)出向四周放射狀均勻分布，周邊血管形態(tài)正常。B組和C組視網(wǎng)膜血管迂曲擴(kuò)張并形成大量新生血管。D組、E組和F組視網(wǎng)膜新生血管擴(kuò)張程度減輕，管徑逐漸恢復(fù)正常，數(shù)量也有不同程度的減少，且呈量效關(guān)系。突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)

4、目：A組視網(wǎng)膜各層清楚內(nèi)界膜均一，幾乎未見突破內(nèi)界膜的細(xì)胞核；B組和C組內(nèi)界膜粗糙，可見大量突破內(nèi)界膜的細(xì)胞核；D組、E組和F組突破內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)依次減少，且F組減少最明顯。各組血管分支點數(shù)目：A組16.50±3.90個；B組37.44±6.47個；C組37.08±5.10個；D組30.80±6.85個；E組26.08±5.08個；F組19.83±3.51個。突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜血管內(nèi)皮細(xì)胞核計數(shù)個數(shù)為：A組0.22±0.42，B組35.

5、66±4.70，C組35.30±4.54,D組27.30±4.28，E組21.41±3.53，F(xiàn)組7.41±2.87。除B組與C組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其余各組組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。免疫組化：各組均可見VEGFR-2蛋白的陽性表達(dá)，B組、C組陽性表達(dá)較高，表現(xiàn)為棕褐色顆粒或團(tuán)塊，均高于D組、E組、F組，且后三組的陽性表達(dá)依次減低，但高于 A組。PDGFR-β蛋白的各組均未檢測到陽性表達(dá)。RT-PCR：VEGFR-

6、2m RNA的含量，各組均可見亮的條帶，B、C組亮度最大，即VEGFR-2m RNA的最高，含量均高于最D、E、F組，且D、E、F組含量依次減少，但高于A組。在各組中均未加到亮的條帶，即PDGFR-βmRNA的含量各組均未檢測到。
　　結(jié)論在大鼠OIR模型中，索拉非尼能有效抑制視網(wǎng)膜新生血管的生成，且抑制效果呈劑量依賴性。其抑制作用主要通過VEGF/VEGFR-2信號通路實現(xiàn)，推測因乳鼠尚未成熟，視網(wǎng)膜組織中周細(xì)胞的含量極低，其表