蘇拉明對(duì)兔角膜堿燒傷后新生血管抑制作用的研究.pdf

1、目的：角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)因常使角膜的透明性喪失，引起嚴(yán)重視力障礙，而成為重要的致盲眼病之一。角膜的化學(xué)燒傷，特別是堿燒傷容易誘發(fā)角膜新生血管生成，而角膜新生血管的治療十分棘手，故近年來(lái)抑制角膜新生血管藥物的研究越來(lái)越被人們所關(guān)注。蘇拉明(suramin)是一種水溶性的化學(xué)合成藥物，能夠與生長(zhǎng)因子受體結(jié)合，阻斷生長(zhǎng)因子與靶細(xì)胞結(jié)合，從而起到抑制生長(zhǎng)因子的作用。近年來(lái)對(duì)蘇拉明抑制體外

2、培養(yǎng)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及增加抗青光眼術(shù)后療效的研究已有報(bào)道，但對(duì)抑制角膜新生血管的研究尚未見(jiàn)諸報(bào)端。為了進(jìn)一步探討蘇拉明對(duì)新生血管的抑制作用，本實(shí)驗(yàn)擬將蘇拉明用于兔角膜堿燒傷新生血管模型，觀察新生血管情況，并對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子-I(insulin-like growth factor-I，IGF-I)的表達(dá)進(jìn)行分析，旨在研究其二者與角膜

3、堿燒傷后新生血管的關(guān)系，并探討蘇拉明對(duì)新生血管的抑制作用，以期為今后治療角膜新生血管提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選用新西蘭大白兔48只，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組：空白組、對(duì)照組、治療組。每組各16只動(dòng)物，計(jì)32只眼。對(duì)照組與治療組動(dòng)物制備角膜堿燒傷模型，治療組自術(shù)日起給予8g/L蘇拉明溶液點(diǎn)眼，4次/日，每次1滴；對(duì)照組自術(shù)日起給予氯霉素眼水點(diǎn)眼，4次/日，每次1滴。用裂隙燈顯微鏡分別于燒傷后1、4、7、14天時(shí)觀察三組動(dòng)物角膜新生血管

4、生長(zhǎng)情況，并用數(shù)碼相機(jī)照相，測(cè)量長(zhǎng)入角膜的新生血管長(zhǎng)度。三組動(dòng)物分別于燒傷后1、4、7、14天各隨機(jī)選取4只空氣栓塞處死，迅速摘取雙眼球，剪下角膜組織，其中1/2用于HE染色和免疫組化分析VEGF與IGF-Ⅰ含量，其余部分制備透射電鏡標(biāo)本。對(duì)圖象中的陽(yáng)性反應(yīng)部位進(jìn)行光密度分析，用透射電鏡觀察照相，新生血管面積、VEGF與IGF-Ⅰ表達(dá)的半定量測(cè)定結(jié)果均以x±s表示，用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。 結(jié)果：1.裂隙燈顯微鏡觀察及數(shù)

5、碼照相：術(shù)后對(duì)照組與治療組各動(dòng)物角膜堿燒傷區(qū)即出現(xiàn)水腫、渾濁。對(duì)照組：術(shù)后第1天結(jié)膜充血明顯，角膜緣處血管充盈，炎癥反應(yīng)較明顯，分泌物較多；第3天角膜緣處有新生血管芽呈刷狀生長(zhǎng)，向角膜中央生長(zhǎng)，生長(zhǎng)迅速；第7天新生血管長(zhǎng)度己達(dá)燒傷區(qū)，角膜仍水腫渾濁；第14天新生血管管徑減小，蔓延面積增加。治療組：術(shù)后第1天結(jié)膜中度充血，角膜緣處血管稍充盈，炎癥反應(yīng)較輕；第3天角膜緣處部分區(qū)域有新生血管芽，生長(zhǎng)緩慢；第7天新生血管長(zhǎng)度達(dá)燒傷區(qū)邊緣；第14

6、天新生血管顏色變淺，面積稍增加?？瞻捉M：未見(jiàn)任何變化。 2.角膜新生血管面積計(jì)算：術(shù)后第1天各組均無(wú)新生血管生長(zhǎng)。術(shù)后第4、7、14天，空白組未出現(xiàn)角膜新生血管，對(duì)照組與治療組均有角膜新生血管生長(zhǎng)，且治療組角膜新生血管面積較對(duì)照組減少，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P＜0.01)。 3.角膜組織VEGF與IGF-Ⅰ的免疫組織化學(xué)分析：空白組VEGF、IGF-Ⅰ的表達(dá)無(wú)明顯變化。對(duì)照組與治療組術(shù)后第1天角膜上皮層VEGF、IGF

7、-Ⅰ的表達(dá)增高；第4天VEGF、IGF-Ⅰ的表達(dá)明顯增高，基質(zhì)層內(nèi)亦出現(xiàn)高表達(dá)；第7天，角膜VEGF、IGF-Ⅰ的表達(dá)水平降低，直至第14天基本降至正常水平。在第1、4、7天，對(duì)照組與治療組的VEGF、IGF-Ⅰ的表達(dá)均比空白組增多，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P＜0.01)，但治療組較對(duì)照組減少，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P＜0.01)。第14天，三組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。同時(shí)證實(shí)VEGF、IGF-Ⅰ的表達(dá)呈直線正相關(guān)關(guān)系。

8、 4.組織病理學(xué)改變： 4.1光鏡下觀察：空白組各標(biāo)本角膜上皮完整，細(xì)胞排列整齊規(guī)則，上皮細(xì)胞間少見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組：術(shù)后第1天，角膜上皮不完整，細(xì)胞排列紊亂，上皮細(xì)胞間可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；術(shù)后第4天，炎癥細(xì)胞增多，角膜緣處出現(xiàn)大量新生血管，管徑較大。術(shù)后第7天，角膜上皮層完整，仍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，基質(zhì)層可見(jiàn)大量新生血管，較成熟，；術(shù)后第14天，炎癥細(xì)胞有所減少，基質(zhì)層大量成熟新生血管，管徑減小。治療組：術(shù)后第1天，角膜

9、上皮不完整，上皮細(xì)胞間可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；術(shù)后第4天，角膜上皮層細(xì)胞排列尚整齊，上皮間及基質(zhì)層可見(jiàn)炎癥細(xì)胞，角膜緣處出現(xiàn)新生血管，管徑稍大；術(shù)后第7天，角膜上皮層完整，有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，基質(zhì)層可見(jiàn)新生血管，較成熟，管腔較?。恍g(shù)后第14天，角膜上皮細(xì)胞排列整齊，炎癥細(xì)胞減少，基質(zhì)層可見(jiàn)成熟新生血管，管腔狹窄。電鏡下觀察：第7天，空白組：角膜上皮層游離面微絨毛較多，細(xì)胞間隙可，細(xì)胞間的橋粒與半橋粒連接較多，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體正常。對(duì)照組：角膜上