血管緊張素-（1-7）在延髓腹外側(cè)調(diào)節(jié)血壓的機制.pdf

1、由于生活節(jié)奏加快、社會競爭激烈使人們持續(xù)精神緊張、高度心理應(yīng)激，導(dǎo)致高血壓的發(fā)病率在我國逐年上升，據(jù)統(tǒng)計每年新增300萬人以上，并呈低齡化趨勢。長期高血壓會導(dǎo)致心、腦、腎等重要臟器的慢性損害，嚴重危害人民的健康。 在維持正常血壓和調(diào)節(jié)心血管活動中腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)發(fā)揮著重要的作用。近年來的研究表明，除了血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)有強烈的縮血管作用外，該系統(tǒng)中一直未受重視的血管緊張素-(1-7)[Angq,1-7)]是該

2、系統(tǒng)中一種新的有活性的物質(zhì)，在心血管功能調(diào)節(jié)中也起著重要作用。在體內(nèi)，Ang-(1-7)的生成有三條途徑：一是AngⅠ在脯氨酰內(nèi)肽酶(PEP)或中性內(nèi)肽酶(NEP)催化下產(chǎn)生，二是AngⅡH在PEP、脯氨酰羧肽酶(PCP)或血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)2催化下產(chǎn)生，三是Ang-(1-9)在NEP或ACE催化下產(chǎn)生，以前兩條途徑生成為主。Ang-(1-7)在人和動物的下丘腦、腦干、腎、血液等許多部位存在并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，An

3、g-(1-7)有些作用與AngⅡ相反，如Ang-(1-7)不產(chǎn)生渴覺作用和食鹽欲等；有些作用與AngⅡ類似，如將Ang-(1-7)微電泳到大鼠下丘腦室旁核可刺激血管升壓素的釋放，微量注射Ang-(1-7)至延髓腹外側(cè)(VLM)可引起心血管活動的改變等，但其機制目前仍不清楚。Ang-(1-7)與AngⅡ在不同部位和情況下存在著復(fù)雜的協(xié)同或相拮抗作用，Ang-(1-7)可能比AngⅡ具有更獨特的生理學(xué)或病理學(xué)意義，因此，探討Ang-(1-7

4、)作用的機制尤其是在中樞調(diào)節(jié)血壓的機制有著十分重要的意義。 實驗表明，VLM是調(diào)節(jié)心血管活動的中樞關(guān)鍵部位，它一般可分為頭端區(qū)(RVLM)和尾端區(qū)(CVLM)兩部分。RVLM是交感縮血管神經(jīng)元所在的部位，刺激RVLM可增強交感傳出和升高血壓。RVLM將來自其他中樞和外周傳入信息整合后傳到脊髓中間外側(cè)柱(IML)交感節(jié)前神經(jīng)元處，最終完成對心血管活動的調(diào)節(jié)。目前資料認為，CVLM的神經(jīng)元并不直接投射到IML，而是通過抑制RVLM的

5、神經(jīng)元活動而實現(xiàn)其對心血管調(diào)節(jié)的。研究證明，緊張應(yīng)激引起的高血壓除與中樞交感興奮性增強有關(guān)外，其復(fù)雜過程中還可能與多種神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)質(zhì)參與有關(guān)。在VLM含有多種神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)質(zhì)，如兒茶酚胺、氨基酸、一氧化氮(NO)、血管緊張素等。 在高血壓的治療中，祖國醫(yī)學(xué)中的針刺降壓作用已被大量的臨床實踐所證明，同時針刺淵節(jié)心血管自主神經(jīng)系統(tǒng)締活動的研究也在動物上取得了很大的講展。因此深入研究針刺在應(yīng)激致高血壓大鼠中的作用，將為高血壓的發(fā)病機制和

6、臨床治療提供理論依據(jù)。 本工作采用中樞微量注射、微透析和高效液相色譜(HPLC)-熒光檢測、電針等技術(shù)和方法，以動脈血壓、心率、氨基酸等的變化為觀察指標，探索Ang-(1-7)在正常大鼠、應(yīng)激致高血壓大鼠的VLM調(diào)節(jié)血壓的機制以及電針對其影響。 第一部分Ang-(1-7)在RVLM調(diào)節(jié)血壓的機制 1、Ang-(1-7)在正常大鼠的RVLM調(diào)節(jié)血壓的機制 在6只雄性大鼠的RVLM單側(cè)(右側(cè))微量注射Ang-

7、(1-7)10pmol(本實驗中所給予的試劑的注射量均為0．1μl，以下省略)、25pmol或50pmol可引起劑量依賴性血壓升高。而在RVLM單側(cè)微量注射Ang-(1-7)選擇性受體拮抗劑Ang779100pmol后可引起血壓降低(n=7，P＜0.05)。在同一部位微量注射人工腦脊液(ACSF)(n=6)后血壓無明顯變化，將微量注射Ang-(1-7)組或Ang779組分別與微量注射ACSF組的數(shù)據(jù)相比較，差別有顯著性意義(P＜0.05

8、)。 2、Ang-(1-7)在應(yīng)激致高血壓大鼠的RVLM調(diào)節(jié)血壓的機制 大鼠經(jīng)15天足底電擊結(jié)合噪聲應(yīng)激處理(簡稱應(yīng)激組)(n=10)后，血壓明顯升高，收縮壓(SBP)為144.7±6.1mmHg，與正常血壓對照組SBP(116.3士4.7mmHg)(n=10)相比，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜O.01)。在應(yīng)激組的RVLM及IML，EAAAsp、Glu釋放與正常血壓對照組相比明顯增多(P＜0.05)。若大鼠在15天的連續(xù)應(yīng)

9、激過程中最后5天同時給予“足三里”穴位刺激(簡稱電針組)，SBP為123.14±5．2mmHg，與應(yīng)激組大鼠的SBP相比有明顯下降(P＜0.01)；RVLM及IML內(nèi)EAAAsp、Glu的釋放與應(yīng)激組大鼠的Asp、Glu相比明顯減少(P＜0.05)。在應(yīng)激組大鼠的RVLM，微量注射Ang-(1-7)25pmol(n=10)能夠引起升壓、RVLM及IML內(nèi)Asp和Glu釋放增多，且作用明顯強于正常血壓對照組(P＜0.01)；應(yīng)激組大鼠對A

10、ng-(1-7)的上述反應(yīng)增強作用能夠被電針所抑制(P

11、、RVLM及IML內(nèi)Gly、Tau釋放增多的反應(yīng)明顯增強，電針可通過調(diào)節(jié)相應(yīng)的RVLM及IML內(nèi)氨基酸釋放而抑制應(yīng)激性高血壓大鼠對Ang-(1-7)引起的反應(yīng)增強作用。 第二部分Ang-(1-7)在CVLM調(diào)節(jié)血壓的機制 1、Ang-(1-7)在正常大鼠的CVLM調(diào)節(jié)血壓的機制 在6只大鼠的CVLM單側(cè)微量注射Ang-(1-7)10pmol、25pmol或50pmol可引起劑量依賴性血壓降低(P＜0.05)，而在

12、CVLM單側(cè)微量注射Ang-(1-7)選擇性受體拮抗劑Ang779100pmol后可引起血壓升高(n=7，P＜0．05)。在同一部位微量注射ACSF后血壓無明顯變化，將微量注射Ang-(1-7)組或Ang779組分別與微量注射ACSF組的數(shù)據(jù)相比較，差別有顯著性意義(P＜0．05)。 為探討Ang-(1-7)降壓的機制，在CVLM微量注射Ang-(1-7)25pmol引起降壓的同時進行同一部位或RVLM的微透析(n=11)，HP

13、LC-熒光檢測法測定透析液中的氨基酸，觀察氨基酸的變化。觀察到在CVLMEAA中的Glu釋放增多，IAA中的Tau釋放減少，而RVLMGlu釋放減少、IAAγ一氨己丁酸(GABA)釋放增多；相反，在CVLM微量注射Ang779100pmol(n=11)引起血壓升高的同時，伴CVLM區(qū)Glu釋放減少和Tau釋放增多，而RVLM區(qū)Glu釋放增多、GABA釋放減少。為進一步證實氨基酸類遞質(zhì)與Ang-(1-7)或Ang779所引起的降壓或升壓作

14、用的關(guān)系，在CVLM用Glu拮抗劑Kynal.4pmol(n=6)或Tau受體拮抗劑TAG1.3nmol(n=6)分別阻斷Glu或Tau的作用后，再在CVLM微量注射Ang-(1-7)或Ang-779，觀察到它們所引起的降壓或升壓作用明顯減弱(P＜0．05)。在RVLM用GABA受體拮抗劑荷包牡丹堿(Bicu)O.25mnol(n=6)后再在CVLM微量注射Ang-(1-7)，血壓不再降低；而在RVLM使用ACSF(n=6)后，再在CV

15、LM給于Ang-(1-7)，血壓仍能降低。結(jié)果表明，Ang-(1-7)在CVLM引起降壓的作用與該區(qū)域的EAAGlu釋放增加、IAATau釋放減少以及通過RVLM使GABA釋放增加、Glu釋放減少有關(guān)。 2.Ang-(1-7)在應(yīng)激致高血壓大鼠的CVLM調(diào)節(jié)血壓的機制 在應(yīng)激組大鼠的CVLM，微量注射Ang-(1-7)25pmol(n=10)能夠引起降壓、Glu釋放增多，微量注射Ang779l00pmol(n=10)引起

16、升壓、Tau釋放增多，且作用明顯強于正常血壓對照組(P＜0.05)。電針組在上述同樣的部位，注射相同劑量的藥物可引起類似的反應(yīng)，但程度明顯小于應(yīng)激組(P＜0．05)。提示在CVLM，應(yīng)激性高血壓大鼠對Ang-(1-7)引起降壓、Glu釋放增多，或Ang779引起升壓、Tau釋放增多的反應(yīng)明顯增強，電針可通過調(diào)節(jié)相應(yīng)的CVLM氨基酸釋放而抑制應(yīng)激性高血壓大鼠對Ang-(1-7)引起的反應(yīng)增強作用。 綜上所述，本工作提示：

17、l、在大鼠的VLM存在內(nèi)源性Ang-(1-7)，并且在正常情況下，可能由自身特異性受體介導(dǎo)，在RVLM具有緊張性升壓作用，在CVLM具有緊張性降壓作用。 2、Ang-(1-7)在RVLM引起的升壓與該區(qū)域及IML的EAAAsp、Glu釋放增加、IMLIAATau釋放減少有關(guān)，在CVLM引起的降壓與該區(qū)域的EAAGlu釋放增加、IAATau釋放減少有關(guān)。 3、Ang-(1-7)在CVLM的降壓作用是通過GABA抑制RVLM