血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2-血管緊張素(1-7)-Mas軸通過調(diào)控自噬影響肺纖維化的作用機(jī)制.pdf

1、特發(fā)性肺纖維化(IPF)是一種慢性不可逆的致死性疾病。在IPF的發(fā)展過程中，肺成纖維細(xì)胞受到激活并且分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，以及異常的損傷修復(fù)，最終導(dǎo)致了纖維化的形成。
　　腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是本課題研究重點(diǎn)，包含血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)-血管緊張素(Ang)Ⅱ-AngⅡ-1型受體(AT1R)軸和ACE2-Ang(1-7)-Mas軸。AngⅡ和Ang(1-7)作為RAS中的代表性多肽，二者功能相對(duì)拮抗，在機(jī)體的水電解質(zhì)

2、代謝、血管收縮等維持機(jī)體生存方面有著重要作用，近些年發(fā)現(xiàn)其與纖維化有密切聯(lián)系。前期的研究及近年對(duì)RAS在器官纖維化中的研究表明，ACE-AngⅡ-AT1R軸增加氧化應(yīng)激，誘導(dǎo)心肌、血管、肝臟和肺臟的纖維化，而ACE2-Ang(1-7)-Mas軸通過拮抗ACE-AngⅡ-AT1R軸，降低氧化應(yīng)激發(fā)揮抗纖維化作用。
　　本研究繼續(xù)探討ACE2-Ang(1-7)-Mas軸改善肺纖維化的新機(jī)制，并將自噬作為研究的新方向。自噬是細(xì)胞內(nèi)各種組

3、分被運(yùn)送至溶酶體并被降解和重新利用的過程，不僅參與生理活動(dòng)的調(diào)節(jié)，還參與調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激、器官纖維化等多種病理過程。自噬能夠改善肺纖維化，但目前對(duì)于ACE2和Ang(1-7)在自噬方面的研究，主要在心腦血管系統(tǒng)，大多表現(xiàn)為抑制自噬，但也有誘導(dǎo)自噬的報(bào)道。ACE2-Ang(1-7)-Mas軸的自噬水平如何，干預(yù)自噬對(duì)于氧化應(yīng)激和肺纖維化的影響如何，將是本研究關(guān)注的重點(diǎn)。
　　目的：
　　探究ACE2-Ang(1-7)-Mas軸自噬

4、水平如何，調(diào)控自噬對(duì)氧化應(yīng)激和肺纖維化的影響。
　　方法：
　　1、原代肺成纖維細(xì)胞分離、純化、鑒定及培養(yǎng)。
　　2、細(xì)胞ATP含量測(cè)定。
　　3、動(dòng)物模型建立。
　　4、肺組織切片染色和免疫組化。
　　5、蛋白質(zhì)免疫印跡法。
　　結(jié)果：
　　探究Ang(1-7)和ACE2對(duì)自噬蛋白表達(dá)水平的影響，干預(yù)ACE2-Ang(1-7)-Mas軸和自噬通路，檢測(cè)自噬、膠原和NOX4蛋白表達(dá)水平。博

5、來霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化，評(píng)價(jià)小鼠肺組織纖維化水平和NOX4、自噬蛋白水平，進(jìn)一步驗(yàn)證ACE2-Ang(1-7)-Mas軸改善肺纖維化的機(jī)制。
　　結(jié)論：
　　1.Ang(1-7)誘導(dǎo)自噬，降低AngⅡ誘導(dǎo)的膠原和NOX4水平，Mas拮抗劑A779通過抑制自噬逆轉(zhuǎn)這一作用。
　　2.ACE2+/+肺成纖維細(xì)胞自噬水平增高，減輕AngⅡ誘導(dǎo)的膠原和NOX4水平，A779和自噬抑制劑逆轉(zhuǎn)上述作用。
　　3.ACE2+/