血管緊張素-(1-7)對血管緊張素Ⅱ致人臍靜脈內皮細胞氧化應激損傷的影響及機制分析.pdf

1、目的：本實驗通過血管緊張素Ⅱ誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)，建立氧化應激模型，探討Ang-(1-7)對AngⅡ致HUVECs氧化應激損傷的影響及機制分析。
　　 方法：無菌培養(yǎng)HUVECs，選擇生長良好的第2～5代細胞用于實驗。實驗分為：(1)對照組：不加干預因素；(2)Ang-(1-7)組：加入10-6mol/L的Ang-(1-7)；(3)A-779組：加入10-6mol/L的A-779；(4)AngⅡ組：加入10-6m

2、ol/L的AngⅡ；(5)AngⅡ+Ang-(1-7)組：加入10-6mol/L的AngⅡ基礎上，分別加入不同濃度的Ang-(1-7)(10-6～10-9mol/L)；(6)AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779組：用10-6mol/L的A-779預處理30min后，再用終濃度為10-6mol/LAng-(1-7)預處理30min，最后加入終濃度為10-6mol/LAngⅡ。干預16小時后收集細胞及培養(yǎng)液。采用流式細胞儀檢測細胞內RO

3、S的熒光強度，采用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物岐化酶(SOD)的活力，用硫代巴比妥酸(Thibabituric Acid TBA)法測定MDA的含量。
　　 結果：⑴細胞形態(tài)觀察：熒光顯微鏡下觀察，AngⅡ組與對照組相比細胞綠色熒光強度明顯增強，在AngⅡ基礎上加入Ang-(1-7)后，綠色熒光強度較AngⅡ組相比明顯減弱，Ang-(1-7)與A-779組與對照組相比均無明顯差異。⑵流式細胞儀檢測結果流式細胞儀分析顯示，Ang-(

4、1-7)(10-6mol/L)與A-779(10-6mol/L)組與對照組(38.9±3.5，39.2±2.8與39.3±2.2)相比P＞0.05，無統(tǒng)計學意義，提示單獨加入Ang-(1-7)和A-779對內皮細胞產生ROS沒有影響；AngⅡ(10-6mol/L)組與對照組(98.9±4.5與39.3±2.2)相比P＜0.05，提示AngⅡ致細胞內ROS生成增加；AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組(43.7±2.3與98.9±4

5、.5)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)抑制了AngⅡ的促細胞ROS生成作用；AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779組與AngⅡ+Ang-(1-7)組(78.2±4.3與43.7±2.3)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)的作用被A-779阻斷，Ang-(1-7)對AngⅡ的拮抗作用可能是MAS受體介導的；Ang-(1-7)不同濃度組間(77.5±2.7，68.1±2.5，55.2±3.2，43.7±2.3)相比P＜0.0

6、5，提示Ang-(1-7)呈劑量依賴性抑制了AngⅡ的促ROS生成作用。⑶Ang-(1-7)(10-6mol/L)與A-779(10-6mol/L)組與對照組(34.2±1.23，34.8±1.03，34.5±1.27)相比P＞0.05，無統(tǒng)計學意義，提示單獨加入Ang-(1-7)和A-779對內皮細胞的SOD活力沒有影響；AngⅡ(10-6mol/L)組與對照組(12.4±1.01與34.5±1.27)相比P＜0.05，提示AngⅡ致

7、細胞內SOD活力下降；AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組(30.9±0.79與12.4±1.01)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)抑制了AngH的致細胞SOD活力下降作用；AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779組與AngⅡ+Ang-(1-7)組(19.2±0.87與30.9±0.79)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)的作用被A-779阻斷，Ang-(1-7)對AngⅡ的拮抗作用可能是MAS受體介導的；Ang-(

8、1-7)不同濃度組間(17.3±0.78，22.9±0.87，27.3±0.67，30.9±0.79)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)呈劑量依賴性抑制了AngⅡ致細胞內SOD活力下降作用。⑷Ang-(1-7)(10-6mol/L)與A-779(10-6mol/L)組與對照組(11.02±0.33，10.09±0.41與10.08±0.32)相比P＞0.05，無統(tǒng)計學意義，提示單獨加入Ang-(1-7)和A-779對內皮細胞MDA

9、的生成沒有影響；AngⅡ(10-6mol/L)組與對照組(45.9±0.59，10.08±0.32)相比P＜0.05，提示AngⅡ致內皮細胞MDA生成增加；AngⅡ+Ang-(1-7)組與AngⅡ組(18.9±0.43，45.9±0.59)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)抑制了AngⅡ的促內皮細胞MDA生成作用；AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779組與AngⅡ+Ang-(1-7)組(44.8±0.62，18.9±0.43)相

10、比P＜0.05，提示Ang-(1-7)的作用被A-779阻斷，Ang-(1-7)對AngⅡ的拮抗作用可能是MAS受體介導的；Ang-(1-7)不同濃度組間(38.5±0.54，32.1±0.51，24.8±0.47，17.9±0.43)相比P＜0.05，提示Ang-(1-7)呈劑量依賴性抑制了AngⅡ的致MDA生成作用。
　　 結論：①AngⅡ可以致人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)氧化應激。②Ang-(1-7)呈劑量依賴性抑制A