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文檔簡介
1、第四軍醫(yī)大學博士學位論文慶大霉素毒性機理及水楊酸對其拮抗作用的實驗研究姓名:陳賢明申請學位級別:博士專業(yè):耳鼻咽喉科學指導教師:王錦玲2000.5.1第四軍醫(yī)大學博士研究生學位論文在血管紋處染色較淺;NOS3在血管紋處染色較深,在Hensen細胞處不染色;NOS2不表達。GM組耳蝸NOSI和NOS3染色范圍與前者相似,只在某些部位染色加深;lmNOS2染色陽性。為觀察NO含量對GM耳毒性影響,將動物分成GM組;GMLArginine(高
2、水平)組;GML—NMMA0氐水平)組和對照組。檢測各組ABR反』Ⅳ閩、血清和耳蝸組織NO含量及耳蝸鋪片觀察。結果;各實驗組ABR反應閾均提高,高水平組ABR反應閾提高顯著,低水平組ABR反應閾提高較GM組低。GM組血清和耳蝸組織NO含量顯著升高,高水平組NO含量進一步升高,低水平組NO含量減少。耳蝸鋪片顯示高水平組毛細胞損失較GM組和低水平組嚴重。結論:GM可誘導耳蝸NOS表達,NO含量增加可加重GM耳毒性,抑制NO生成可減輕其耳毒性
3、。三、慶大霉素及其代謝產物對豚鼠耳蝸外毛細胞[Ca2]i的影響對離體耳蝸外毛細胞經鈣熒光指示劑F|uro3負載后,用激光掃描共聚焦顯微鏡測定了GM及GM代謝產物等不同成份對離體耳蝸外毛細胞內游離鈣濃度的影響。結果:GM可引起[Cd】i短暫下降,并阻止高鉀液誘導的細胞去極化時鈣的內流。GM與肝組織勻漿孵育后形成的GM代謝產物使[Ca”1i長時間升高,不阻止鉀誘導去極化時鈣的內流。單純肝組織勻漿不引起[Caz1i變化。結論:GM引起離體耳蝸
4、毛細胞【Ca2’】i短暫下降,可能與GM急性耳毒性有關:GM代謝產物引起離體耳蝸毛細胞[Ca”1i持續(xù)升高,可能于GM慢性耳毒性作用有關。pq、慶大霉素誘導豚鼠耳蝸細胞凋亡本實驗利用TUNEL原位雜交技術和透射電鏡觀察不同劑量GM注射后耳蝸組織細胞凋亡情況。結果:GM注射后耳蝸組織細胞凋亡增加,內外毛細胞區(qū)、支持細咆區(qū)、耳蝸外側壁和螺旋神經節(jié)細胞均有凋亡。低劑量組凋亡細胞多,用藥早期凋亡細胞多。高劑量組凋亡細胞少,用藥后期凋亡細胞少,壞
5、死細胞增多。結論:GM可誘導耳蝸細胞凋亡,病變程度與用藥量和用藥時間有關。五、耳蝸及毛細胞體外培養(yǎng)觀察水楊酸鈉對慶大霉素耳毒性的抑制作用根據培養(yǎng)基所含成份不同分為5組,即GM組、GM代謝產物組、NaSA組、NaSAGM代謝產物組和對照組。將酶消化分離的豚鼠耳蝸外毛細胞在上述各培養(yǎng)鹱巾短期培養(yǎng),光鏡觀察細胞形態(tài)變化,并結合熒光染色判斷細胞活性,兩種觀察結果進行比較。另取耳蝸,在不去除蝸殼情況下置上述培養(yǎng)基中短期培養(yǎng),臺盼蘭染色,觀察毛細胞
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