流式細胞儀三色法檢測外周血Th亞群方法的建立及圍手術(shù)期同種輸血對食管癌患者Th亞群的影響.pdf

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文流式細胞儀三色法檢測外周血Th亞群方法的建立及圍手術(shù)期同種輸血對食管癌患者Th亞群的影響姓名：葉衛(wèi)東申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：劉華平張循善20050501安徽醫(yī)科大學碩士學位論文流式細胞儀三色法檢測外周血Th亞群方法的建立及圍手術(shù)期同種輸血對食管癌患者Th亞群的影響摘要目的研究佛波酯(Phorbol12一myristate13一Acetate，PMA)對T輔助細胞(Th)表面CD4分子表達的

2、影響，建立流式細胞儀三色法檢測外周血Th細胞亞群的方法及合適的質(zhì)量控制方案；檢測食管鱗癌患者Th細胞亞群的變化和圍手術(shù)期接受同種輸血對食管鱗癌患者手術(shù)后Th細胞亞群的影響。方法用熒光標記的抗CD3／4／8抗體同經(jīng)不同濃度的P姒和l蟾／mL的Ionomycin刺激培養(yǎng)2、3、4h的正常人外周血中的T細胞表面上相應的抗原分子相結(jié)合，溶血后用流式細胞儀檢測CD4通道(Th細胞)的熒光強度；外周血用RPMll640培養(yǎng)液和終濃度為25ng／ml

3、的PMA、l地g／ml的Ionomycin、20ng／ml的Monensin培養(yǎng)2h并固定和破膜后，加入熒光標記的CD4、IFN—Y和IL～4抗體同含相應抗原的細胞相結(jié)合，用流式細胞儀檢測ThO、Thl和Th2細胞；用CD69作為淋巴細胞激活的指標，MPO作為評價通透劑作用效果的指標，建立Th細胞亞群檢測的質(zhì)量控制方法；利用上述方法測定健康對照組、食管鱗癌患者組、圍手術(shù)期接受同種輸血的食管鱗癌患者組和圍手術(shù)期未接受同種輸血的食管鱗癌患者

4、組的術(shù)前和術(shù)后5天外周血Th細胞亞群。結(jié)果培養(yǎng)后CD4通道的平均熒光強度(MFI)隨PMA質(zhì)量濃度的升高和刺激時間的延長而降低，25ng／ml的P凇刺激培養(yǎng)2h，CD4細胞與CD4一細胞能明顯區(qū)分，CD3細胞900／oDA上都表達CD69，通透劑作用后90％DA上的粒細胞MPO；優(yōu)化出終濃度為25ng／ml的PMA、lgg／ml的Ionomycin、20ng／mi的Monensin培養(yǎng)2h的培養(yǎng)方案，成功建立流式細胞儀CD4、IFN—Y