流式細(xì)胞儀介紹

1、流式細(xì)胞儀產(chǎn)品介紹,楊海霞德國(guó)美天旎生物技術(shù)公司 (僅供內(nèi)部培訓(xùn)),主要內(nèi)容,流式細(xì)胞儀基本原理MACSQuant流式的性能流式的競(jìng)爭(zhēng)分析,流式細(xì)胞儀基本原理,流式細(xì)胞術(shù)（FCM）： 就是對(duì)在高速流動(dòng)的鞘液包括下的細(xì)胞、粒子進(jìn)行分析和分選的技術(shù)，這種細(xì)胞或粒子是經(jīng)過(guò)特異熒光標(biāo)記的。其特點(diǎn)是測(cè)量速度快，每秒鐘能測(cè)數(shù)千個(gè)乃至上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，且可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量。,流式細(xì)胞術(shù)的概念,流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展趨勢(shì),單純

2、到復(fù)雜檢測(cè)熒光參數(shù)定量手動(dòng)到自動(dòng)熒光試劑,,液流,檢測(cè)器,光源,電子計(jì)算機(jī),流式細(xì)胞檢測(cè)原理,細(xì)胞可被檢測(cè)的參數(shù)(無(wú)探針標(biāo)記),,,散射光信號(hào): 細(xì)胞內(nèi)在的結(jié)構(gòu)參數(shù)細(xì)胞大小前向角散射 (FSC)細(xì)胞內(nèi)部顆粒性側(cè)向角散射 (SSC),是細(xì)胞或細(xì)胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長(zhǎng)不同。 區(qū)分陰陽(yáng)性：通過(guò)熒光強(qiáng)度可將同一個(gè)細(xì)胞群體中的有熒光標(biāo)記的細(xì)胞與無(wú)熒光標(biāo)記的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。

3、 區(qū)分陽(yáng)性強(qiáng)弱：也可以將陽(yáng)性細(xì)胞中的高FL的細(xì)胞與低FL的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。,相對(duì)熒光強(qiáng)度（FL） (需探針標(biāo)記),,,,散點(diǎn)圖,密度圖,二維等高圖,直方圖,圖 報(bào)告中常見(jiàn)的幾種流式細(xì)胞圖,如何看流式圖,流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用,流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用 染色體核型分析　在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用 用于性別的預(yù)選擇 在微生物學(xué)中的應(yīng)用在細(xì)胞周期研究中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在免疫學(xué)中的應(yīng)用　流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)上

4、的應(yīng)用在血液學(xué)研究中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)新的應(yīng)用,流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用,HIV免疫分型，CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)干細(xì)胞計(jì)數(shù)殘量白血病細(xì)胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病,11,臨床意義,了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)輔助臨床疾病的診斷探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案免疫系統(tǒng)疾病免疫缺陷病，AI

5、DS移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè)腫瘤病人化療后免疫力檢測(cè),流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用,樹(shù)突細(xì)胞研究干細(xì)胞研究癌癥病人的多藥耐藥性細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究細(xì)胞系的鑒定細(xì)胞內(nèi)蛋白的分析細(xì)胞膜電位測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定,流式細(xì)胞儀潛在客戶,醫(yī)院：血液科，檢驗(yàn)科，風(fēng)濕免疫病科，腫瘤科，細(xì)胞治療科,開(kāi)展移植（肝腎）的科室?？蒲性核按髮Ｔ盒＃好庖呦祷蛎庖邔?shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)室，腫瘤研究所，血

6、液病研究所。,MACSQuant流式細(xì)胞儀——細(xì)胞分析的里程碑,多參數(shù)細(xì)胞分析,三激光紫色 (405 nm)40 mW藍(lán)色 (488 nm)25 mW紅色(635 nm)20 mW9個(gè)光學(xué)參數(shù)FSC/SSC + 7 個(gè)熒光通道,MACSQuant光路系統(tǒng),MACSQuant流式細(xì)胞儀的創(chuàng)新特性： 集成，臺(tái)式數(shù)字化流式細(xì)胞儀強(qiáng)大并且直觀的軟件多參數(shù)：3激光，9個(gè)參數(shù)（FSC,SSC,FL1-7)12寸

7、觸摸屏（內(nèi)置）不同用戶登錄模式，可用密碼進(jìn)行保護(hù)2種不同的模式（針對(duì)有豐富經(jīng)驗(yàn)和無(wú)流式經(jīng)驗(yàn)的人員）分析速度可達(dá)10000個(gè)細(xì)胞/秒,無(wú)需計(jì)數(shù)微珠進(jìn)行絕對(duì)計(jì)數(shù)不同的流速控制：25/50/100uL/分鐘自動(dòng)化處理樣本，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清潔，自動(dòng)補(bǔ)償,自動(dòng)標(biāo)記矩陣補(bǔ)償和脫機(jī)補(bǔ)償小巧（60X35X40cm）、低噪、低熱。,流式細(xì)胞儀基本特征,細(xì)胞富集系統(tǒng)絕對(duì)計(jì)數(shù)，無(wú)需微珠自動(dòng)補(bǔ)償自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)標(biāo)記,A new milesto

8、ne in cell analysis,MACSQuant? 分析儀功能強(qiáng)大、操作簡(jiǎn)單的多參數(shù)細(xì)胞分析的理想工具 (高端儀器 – 操作簡(jiǎn)單 – 多種自動(dòng)化選擇),MACS® 富集系統(tǒng)使用MACS微珠磁性富集細(xì)胞細(xì)胞被富集后再進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析預(yù)富集的應(yīng)用：內(nèi)皮祖細(xì)胞檢測(cè)——頻率:每 105 PBMCs 中有1個(gè)細(xì)胞(如 CD34的預(yù)富集)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)——頻率: 每 107 PB

9、MCs 中有1個(gè)細(xì)胞 (如 EpCAM的預(yù)富集)抗原特異性T細(xì)胞檢測(cè)——(如 CD154的預(yù)富集)成分檢測(cè)可以只檢測(cè)富集后組分或者同時(shí)檢測(cè)原始標(biāo)本、陰性組分和陽(yáng)性組分,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：,高靈敏度地分析稀有細(xì)胞,每次反應(yīng)后，自動(dòng)計(jì)算每 µL體積中的細(xì)胞數(shù)——無(wú)須計(jì)數(shù)磁珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，可以完全替代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)用于輔助HIV監(jiān)測(cè)治療CD34絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)用于干細(xì)胞

10、移植,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：,絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)(容積型),自動(dòng)化的多樣本處理：使用 MACS® MiniSampler 和 MACS® 冷凍試管架靈活性高，可使用不同的試管 —— 5 mL tubes ——15 mL tubes ——50 mL tubes通量高(從Chill 96 rack 到 96孔板),MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：,自動(dòng)進(jìn)樣,MACSQuant流

11、式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：,自動(dòng)標(biāo)記,MACS微型載樣器上的試劑架，可最多放置4支染色試劑，如：PI / 7-AAD熒光素標(biāo)記的抗體抗體混合物 (如MACS MC Cocktails)全系列試劑 (抗體 和試劑盒),如:MACS 對(duì)照抗體混合物:MC CD14 Monocyte Cocktail, humanMC CD19 B Cell Cocktail, humanMC CD34/CD133 Cocktail, hum

12、anMC CD34 Cocktail, human MC CD4 T Cell Cocktail, mouseMC CD90 Pan T Cell Cocktail, mouseMC CD19 B Cell Cocktail, mouse…,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：,完全自動(dòng)化的儀器設(shè)置,全自動(dòng)的儀器校準(zhǔn) (使用 MACS Calibration Beads) 7x7 矩陣補(bǔ)償自動(dòng)補(bǔ)償，對(duì)多色分析自動(dòng)生

13、成補(bǔ)償值手動(dòng)補(bǔ)償,儀器操作簡(jiǎn)單、易行:溶液瓶 (1.5L) 附著在儀器兩側(cè)(通過(guò)瓶子上不同的指示燈來(lái)顯示機(jī)器狀態(tài)),結(jié)構(gòu)：數(shù)字化分析速率> 10,000 events /秒流速: 25 / 50 / 100 µL/min,MACSQuant? Analyzer,自動(dòng)化的儀器設(shè)置自動(dòng)校準(zhǔn)儀器（使用MACS校準(zhǔn)微珠）自動(dòng)補(bǔ)償7X7自動(dòng)矩陣補(bǔ)償自動(dòng)清洗自動(dòng)化進(jìn)樣和抗體標(biāo)記帶有清洗工作站（was

14、hing station）的進(jìn)樣針自動(dòng)化進(jìn)樣針臂（y,z方向移動(dòng)）無(wú)加壓系統(tǒng)溶液瓶附著在儀器上儀器狀態(tài)能夠通過(guò)溶液瓶的不同顏色來(lái)指示,用戶友好的儀器操作,12‘’觸摸屏（內(nèi)嵌）Live support 遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，德國(guó)工程師進(jìn)行遠(yuǎn)程在線檢修機(jī)器VGA 接口 (連接第二個(gè)顯示器或者代替的顯示器)功能強(qiáng)大、易于操作——直觀的操作界面 (用于儀器控制, 數(shù)據(jù)獲取和數(shù)據(jù)分析)——不同的用戶模式——拖拉式安裝——

15、含預(yù)設(shè)程序——在個(gè)人電腦上進(jìn)行獨(dú)立數(shù)據(jù)分析——MACSQuant 數(shù)據(jù)（MQD)文件 -FCS格式-FCS3.0 -與其它流式軟件兼容,軟件基本特征,簡(jiǎn)捷的數(shù)據(jù)處理:個(gè)人用戶登錄數(shù)據(jù)自動(dòng)保存在對(duì)應(yīng)的用戶文件夾中MQD – 文件 (內(nèi)部格式)數(shù)據(jù) 儲(chǔ)存/備用: 可用硬盤驅(qū)動(dòng)器 / DVD RW 驅(qū)動(dòng)器, USB 接口, 以太網(wǎng)絡(luò)連接,軟件基本特征,軟件簡(jiǎn)單易操作:鍵盤在顯示屏上 (觸摸式顯

16、示屏)USB接口 – 可用來(lái)連接外設(shè)的鼠標(biāo)、鍵盤條形碼讀碼器,,MACSQuant? Analyzer A new milestone in cell analysis,MACSQuant? Analyzer

17、 A new milestone in cell analysis,MACSQuant? Analyzer A new milestone in cell analysis,流式相關(guān)抗體,針對(duì)流式檢測(cè)的全系列抗體。。。。,-FIT

18、C-PE-APC-Vioblue-……,北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所流式細(xì)胞儀檢測(cè)報(bào)告姓名： 性別： 年齡： 標(biāo)本：病歷： 診斷： 編號(hào)：,淋巴細(xì)胞占有核細(xì)胞 %CD3+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %CD4+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %CD8+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %CD14+細(xì)胞占有核細(xì)胞 %,簽名：

19、 審核者： 日期：,競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì):預(yù)富集功能，高敏感性檢測(cè)罕見(jiàn)細(xì)胞，比如臨床最常用的造血干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、pDC等。非常節(jié)省細(xì)胞，對(duì)于科研珍貴標(biāo)本尤為重要！絕對(duì)的細(xì)胞計(jì)數(shù)，無(wú)需計(jì)數(shù)微珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，可以完全代替細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。自動(dòng)標(biāo)記，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清洗，節(jié)省時(shí)間。自動(dòng)補(bǔ)償，對(duì)多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償數(shù)值小巧的臺(tái)式機(jī)設(shè)計(jì),低噪，低熱非加壓系統(tǒng)進(jìn)樣,MACSQuant

20、? Analyzer A new milestone in cell analysis,34,(25),儀器的競(jìng)爭(zhēng)分析,,BD的各種機(jī)型（一）,calibur,Aria,LSR II,BD的各種機(jī)型（二）,,Canto II,Influx,Beckman的各種儀器（一）,EPICS XL-ADC

21、,Cytomics FC500,Gallios,Moflo,EPICS XL-Altra,Quanta,Partec公司各種機(jī)型（適合植物學(xué)研究）,Amnis公司的ImageStreamX圖像流式細(xì)胞儀,被評(píng)為2008年度生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品之一，是流式細(xì)胞儀上的新突破 .,Milipore公司的Guava,EasyCyte Mini/EasyCyte Plus無(wú)鞘液毛細(xì)管細(xì)胞分析儀,Accuri 的c6-流式細(xì)胞儀,,一種全功能、二激

22、光、六探測(cè)器分析流式細(xì)胞儀系統(tǒng),MACSQuant® Analyzer– “add-ons”􀂃 MACS® MiniSampler􀂃 Chill Racks (Chill 5, 15, 50 or 96 well adapter)􀂃 MACSQuant® Columns􀂃 Additional years of Service

23、􀂃 Fluorochromes, MACS® Control Cocktails and Microbeads􀂃 Instrument Training􀂃 MACSQuant® Calibration Beads􀂃 MACSQuant® Starting Buffer kit􀂃 Individual Buffe

24、r/Solution boxes,,MACSQuant® Analyzers in the World􀂃 Belgium􀂃 Canada􀂃 China􀂃 France􀂃 Germany􀂃 Iceland􀂃 Ireland􀂃 Italy􀂃 Japan

25、􀂃 Russia􀂃 South Korea􀂃 Syria􀂃 United Kingdom􀂃 United States􀂃 Coming soon to the list is: Australia,Flow Cytometry Market􀂃 Estimated to be $1.5 billion

26、in 2008􀂃 (CAGR ~10-15%, $3.7 billion in 2015)􀂃 Instruments 68% - $1.02 billion􀂃 Reagents 32% - $480 million􀂃 Sales in 2009􀂃 Total – 6.1 million € (4.7 million €)𙦦

27、7; Instruments – 2.632 million € (~0.36%)􀂃 Reagents – 3.4 million € (~ 0.99%),Who buys the MACSQuant® Analyzer􀂃 Innovators are the first to purchase instruments and new gadgets􀂃 Most co

28、untries are currently selling to the early adopters􀂃 Some countries have sold a few MQ and are now selling to theresearchers who want/need greater scientific arguments􀂃 ...􀂃 Must be targete

29、d to maximize our success􀂃 Guidelines have been followed in several countries and success is seen!,What have we learned?􀂃 Miltenyi Biotec is still a new player in flow cytometry􀂃 What is the

30、 MB track record in flow cytometry?􀂃 What is the capability of MB Service (in US, EU and around the world)􀂃 MACSQuant is a huge project􀂃 Underestimated level of need on all levels􀂃

31、 We need an improved MACSQuant support structure􀂃 Combination with MACSQuant is a powerful tool􀂃 Fluorochromes􀂃 autoMACS Pro􀂃 gentleMACS􀂃 MACSQuant is the unifier of MACS

32、® brand – not the divider,Goals 2010 – MACS® Cell Analysis􀂃 Gain customer awareness in the market place􀂃 Introduce MACS Cell Analysis as a flow cytometry provider(flow cytometer, fluorochro

33、mes and kits, assays and applications)􀂃 Improve our support structure to augment the offerings􀂃 Become known as a flow cytometry company􀃆 More exposure, publications and reference customers,

34、The rules for Success – Plan, Plan, Plan􀂃 Customer must be ready to buy and have money􀂃 Contact established ~4 weeks prior􀂃 Full presentation times and practical demonstration planned 1 week

35、 prior􀂃 Ensure success - use MACS Reagents and MACS Control reagents􀂃 Day 0: set-up MQ and run calibration (no demo or training)􀂃 Day 1: Seminar and introduction of instrument􀂃 GOA

36、L: We can illustrate the effectiveness of the MQ in all 7 channels􀂃 Stain cells with our antibodies before any customer samples are run on the instrument(customer supplies unstained spleen or PBMC)􀂃