利用PCR技術對禾草內生真菌進行定性分析和定量測定.pdf

1、本研究選取內生真菌特異性引物，成功建立了利用PCR技術對禾草中內生真菌感染狀況的定性分析和定量測定的方法，并將此定量方法應用到內蒙古中東部草原不同地理種群羽茅內生真菌感染量的測定中。通過對內蒙古中東部草原不同地理種群羽茅內生真菌感染狀況的調查，以及染菌狀況和生態(tài)因子的相關性分析，期望能夠解釋羽茅-內生真菌共生體存在的原因，為進一步認識禾本科植物-內生真菌之間的共生關系、更有效地保護和利用這一生物資源提供依據(jù)。 建立了利用PCR技

2、術對黑麥草中內生真菌感染狀況的定性分析和定量測定的方法，并將此定性檢測方法與常規(guī)乳酸-苯胺藍染色法相比較，結果發(fā)現(xiàn)：該方法檢測的敏感性和準確性均高于后者。利用實時熒光PCR定量分析的結果表明：黑麥草葉鞘的含菌量普遍高于葉片；同株不同分蘗之間內生真菌含量無顯著差異；不同植株之間內生真菌含量差異較大。由此可見內生真菌的含量不僅與植物種以及品種有關，也與植物的基因型密切相關。 2003年9月、2004年9月和2005年9月，對內蒙古中

3、東部草原七個不同地理種群羽茅內生真菌的感染率進行調查，發(fā)現(xiàn)各樣地連續(xù)三年羽茅在生長季末期內生真菌的感染率幾乎都達到100％，說明在內蒙古中東部草原羽茅與內生真菌共生是較為普遍的現(xiàn)象。2005年7月調查羽茅染菌率的結果與9月的相比有顯著的差異，說明羽茅中內生真菌的感染率存在季節(jié)動態(tài)。羽茅的染菌率可能與植株的成熟度有關。 從內蒙古中東部草原四個樣地生長的羽茅中，分離純化內生真菌，并觀察其形態(tài)特征(菌落、菌絲、分生孢子、生長速度等)，

4、初步鑒定它們?yōu)镹eotyphodium屬內生真菌，并通過SSR-PCR方法進一步證實了形態(tài)學鑒定的結果。在野外考察過程中，發(fā)現(xiàn)西烏珠穆沁旗和霍林郭勒樣地少數(shù)羽茅的花序和旗葉上有真菌子座，所以推測有些羽茅植株可能感染有性型Epichloё屬真菌。 為了進一步研究羽茅-真菌共生體存在的原因，我們采用實時熒光PCR的方法測定了七個樣地染菌羽茅中內生真菌的含量，并分析染菌量和氣候因子、土壤因子、羽茅生長和生殖狀況的相關性。結果表明，羽茅