利用熒光定量RT-PCR和PCR方法檢測結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群.pdf

1、結(jié)核病仍然是全球重大公共衛(wèi)生問題之一。早期診斷病原菌結(jié)核桿菌復(fù)合群對疾病傳播的有效控制有重大影響。本研究的目的是建立一種新的能快速、準(zhǔn)確檢測結(jié)核病臨床樣本的熒光定量分析方法。
　　我們建立了一種新的熒光定量試驗(yàn)方法(R/P試驗(yàn)），這種方法結(jié)合了熒光定量RT-PCR和熒光定量PCR兩種方法，運(yùn)用雜交探針同時檢測結(jié)核桿菌復(fù)合群(MTBC)的16SrRNA和16SDNA片段?？偤怂?RNA和DNA)從臨床樣本中進(jìn)行抽提。如果同時滿足以下

2、兩個標(biāo)準(zhǔn)，我們就定義為陽性結(jié)果:標(biāo)準(zhǔn)1.如果熒光定量RT-PCR的CT值≤35，這說明臨床樣本中含有結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群;標(biāo)準(zhǔn)2.如果熒光定量RT-PCR與熒光定量PCR兩者拷貝數(shù)的比值≥1.51，這表明臨床樣本中持續(xù)存在活的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群。我們運(yùn)用R/P方法檢測了來自218例結(jié)核可疑患者的235份臨床標(biāo)本（其中207份是肺內(nèi)標(biāo)本，另外28份是肺外標(biāo)本），檢測的結(jié)果同時與抗酸染色法、培養(yǎng)法、以及熒光定量PCR法進(jìn)行比較。在解決了R/P

3、試驗(yàn)與培養(yǎng)結(jié)果之間的分歧后，R/P試驗(yàn)方法總的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、以及陰性預(yù)測值分別為98.2％、97.2％、91.7％、99.4％;而熒光定量PCR總的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、以及陰性預(yù)測值則分別為83.9％、89.9％、72.3％、94.7％。此外，R/P方法監(jiān)測了4例確診結(jié)核患者的抗結(jié)核治療效果，結(jié)果顯示治療前的拷貝數(shù)比值高于治療后的。我們得出以下結(jié)論:R/P方法是一種快速、特異的直接檢測方法，它可以區(qū)分出結(jié)核分枝桿菌