槲皮素苯基異氰酸酯抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、槲皮素(Quercetin，Que)是一種廣泛存在于植物中的天然的黃酮類化合物，具有廣泛的生理活性。據(jù)報(bào)道，槲皮素具有抗炎、抗過(guò)敏、擴(kuò)張冠脈、抗血小板聚集、抗氧化、抗癌防癌、調(diào)節(jié)免疫功能等藥理作用，可能在防治慢性退行性疾病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，因而備受關(guān)注。槲皮素幾乎不溶于水，影響其在人體內(nèi)的吸收和利用，阻礙了槲皮素的臨床開發(fā)應(yīng)用。為了獲得生物利用度改善的槲皮素衍生物，我們最近通過(guò)對(duì)槲皮素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，設(shè)計(jì)并合成了水溶性增強(qiáng)的槲皮素衍生物

2、一槲皮素苯基異氰酸酯(Phenylisocyanate of Quercetin，PHICNQ)。本研究旨在探討其在體內(nèi)、外的抗腫瘤作用。 方法： 以不同劑量的Que(K562 細(xì)胞，40μM-200μM；CT26細(xì)胞，100μM-500μM)和PHICNQ(O.5μM-10μM)作用于培養(yǎng)的人慢性骨髓性白血病細(xì)胞K562、小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞CT26，在不同時(shí)間(24h、48h、72h、96h)收取細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞計(jì)數(shù)

3、法分析腫瘤細(xì)胞抑制率，用PI染色觀察細(xì)胞的凋亡情況，用DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期和凋亡率。我們建立了CT26結(jié)腸癌(BALB／c小鼠)腫瘤模型和LeWis肺癌(C57BL／6小鼠)腫瘤模型，將小鼠隨機(jī)分成4組，分別予以生理鹽水、PHICNQ 0.5mg／Kg、PHICNQ 2.5mg／Kg、PHICNQ 5mg／Kg腹腔注射，連續(xù)21天。觀察小鼠腫瘤生長(zhǎng)情況和生存時(shí)間。行HE染色觀察小鼠各器官組織形態(tài)改變及腫

4、瘤壞死情況，通過(guò)TUNEL法檢測(cè)腫瘤組織細(xì)胞凋亡，通過(guò)CD31免疫組化觀察腫瘤血管生成情況。 結(jié)果： Que、PHICNQ對(duì)K562細(xì)胞和CT26細(xì)胞均有抑制作用，這種作用呈時(shí)間、劑量依賴性。PHICNQ(IC<,50>=2.5uM)抑制K562細(xì)胞增殖作用約為槲皮素的64倍(Que IC<,50>=160uM)。對(duì)CT26細(xì)胞，PHICNQ和Que的IC<,50>值分別為1uM和400uM，PHICNQ對(duì)CT26細(xì)胞的

5、抑制增殖作用約為Que的400倍。在熒光顯微鏡下觀察，PHICNQ處理組腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)特征。DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PHICNQ處理能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞凋亡。用PHICNQ(0.5-10uM)處理K562細(xì)胞和CT26細(xì)胞后，亞G<,l>期細(xì)胞所占比例明顯增高，這種作用呈時(shí)間、劑量依賴性。細(xì)胞周期分析提示PHICNQ所誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡主要發(fā)生于G<,o>／G<,l>及S期。PHICNQ治療具有明顯的

6、抗腫瘤效應(yīng)，腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，小鼠生存期明顯延長(zhǎng)，觀察期間沒有明顯的不良反應(yīng)。病理切片上PHICNQ治療各組可見腫瘤組織壞死明顯，NS對(duì)照組腫瘤組織只有少量壞死。TUNEL染色結(jié)果提示PHICNQ治療組小鼠腫瘤中，凋亡細(xì)胞明顯增多。免疫組化CD31染色結(jié)果顯示，PHICNQ治療各組腫瘤組織內(nèi)新生血管明顯少于NS組。PHICNQ治療中未觀察到小鼠體重、毛發(fā)、食欲及活動(dòng)等變化，鏡下未觀察到各器官組織細(xì)胞形態(tài)改變。 結(jié)論： (

7、1)PHICNQ處理比Que具有更明顯的抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用； (2)PHICNQ處理能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞凋亡； (3)PHICNQ使腫瘤細(xì)胞G<,o>／G<,1>及S期比率明顯下降； (4)PHICNQ治療小鼠具有明顯的抗腫瘤效應(yīng)，腫瘤生長(zhǎng)受到抑制；PmCNO治療組小鼠生存期明顯延長(zhǎng)； (5)PHICNQ治療沒有明顯的不良反應(yīng)； (6)PHICNQ抗腫瘤作用與抑制腫瘤血管形成有關(guān)；