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文檔簡介
1、課題來源:廣東省自然科學(xué)基金(23003)及廣東省科技攻關(guān)項目 (2KM05101S)。目的和意義:1、尋求一種適合臨床需要的,敏感性高、特異性強、高效、經(jīng)濟的檢測肝移植受者外周血淋巴細胞免疫活化基因表達情況的方法;2、通過前面確定的實驗方法,研究肝移植術(shù)后特定淋巴細胞免疫活化基因的表達對急性排斥反應(yīng)發(fā)生的預(yù)測、診斷價值,探索預(yù)測、診斷移植肝急性排斥反應(yīng)發(fā)生的敏感基因和方法。研究方法:1、通過對三種實驗方法在檢測免疫活化基因方面
2、的敏感性、特異性、時效性和經(jīng)濟性進行分析,確定符合臨床需求的最佳方法;2、根據(jù)前面確定的最佳實驗方法,研究肝移植術(shù)后免疫活化基因的表達與急性排斥反應(yīng)發(fā)生的關(guān)系。研究內(nèi)容和過程:1、將14例肝移植受者(其中經(jīng)病理確診為發(fā)生急性排斥反應(yīng)者7例,未發(fā)生排斥者7例)外周血各采取15ml,分為三等份,每份5ml,分別采取逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)定性,Taqman探針熒光PCR法和SYBRGreenⅠ實時定量PCR法進行檢測。將檢測結(jié)果從
3、敏感性、特異性、時效性和經(jīng)濟性等四個方面進行比較,尋求符合需求的最佳方法;2、利用前面確定的實驗方法,檢測56例肝移植受者術(shù)后淋巴細胞特定免疫活化基因(主要是CD28通路相關(guān)的細胞因子有:IL-10,CD40L,F(xiàn)as,IL-2,IFN-γ,F(xiàn)asl,TGF-β1,IL-4,穿孔素,顆粒酶,bcl-xl,TNF-α,IL-1β等13種)的表達情況,結(jié)合臨床資料,研究特定淋巴細胞免疫活化基因表達對急性排斥反應(yīng)的診斷價值,探詢預(yù)測肝移植急性
4、排斥反應(yīng)的敏感基因,確定預(yù)測移植肝急性排斥反應(yīng)發(fā)生的最佳方案。主要結(jié)論:1、SYBRgreenⅠ實時定量PCR方法是可用于肝移植術(shù)后免疫活化基因表達的篩查的敏感性高、特異性強、高效、經(jīng)濟的檢測方法;2、免疫活化基因經(jīng)過SYBR-GreenⅠ熒光實時定量PCR法檢測,實驗結(jié)果準確、可靠,其表達量在排斥反應(yīng)發(fā)生后顯著高于排斥反應(yīng)發(fā)生前(p<0.01)。通過統(tǒng)計分析,發(fā)現(xiàn)最重要的前三種基因分別是:顆粒酶、FasL(CD95L)和穿孔素。當顆粒
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