肝移植受者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞變化及其臨床意義.pdf

1、目的：器官移植的最終目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)移植物耐受即在停用免疫抑制劑下維持移植物功能，但同時(shí)保留受者對(duì)外源性抗原的免疫應(yīng)答。雖然目前臨床上還很難實(shí)現(xiàn)，但已有部分器官移植受者在停用免疫抑制劑后并未出現(xiàn)移植物排斥反應(yīng)，特別是在肝移植受者中較常見(jiàn)。研究表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)在誘導(dǎo)移植物免疫耐受中起重要作用。本研究檢測(cè)同種原位肝移植術(shù)后肝功能穩(wěn)定受者外周血CD4+CD25+FOXP

2、3+ Tregs水平變化，探討不同血藥濃度他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K506)維持免疫治療對(duì)Tregs水平的影響，為臨床肝移植受者移植免疫監(jiān)測(cè)和合理應(yīng)用免疫抑制劑提供依據(jù)。 方法：選擇37例行原位肝移植受者作為研究對(duì)象，所有受者接受FK506維持免疫治療且肝功能長(zhǎng)期穩(wěn)定(>1年)，根據(jù)采血時(shí)的FK506血藥濃度分為低濃度組(FK506<6.0 ng/ml)30例和高濃度組(FK506≥6.0 ng/mL)7例；30例同齡

3、健康人群作為正常對(duì)照組。清晨空腹采靜脈血2ml，肝素抗凝，F(xiàn)icoll淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心，分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，熒光免疫抗體標(biāo)記后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PBMC中CD4、CD25和FOXP3的表達(dá)水平，應(yīng)用Cell quest軟件分析流式檢測(cè)結(jié)果。各群細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比率從流式分析結(jié)果圖中直接讀取，細(xì)胞絕對(duì)數(shù)通過(guò)采血當(dāng)天的血常規(guī)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算。比較各組之間CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Tregs絕對(duì)數(shù)

4、和比率差異，同時(shí)對(duì)肝移植受者Tregs水平與FK506血藥濃度進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析。 結(jié)果：低濃度組受者外周血CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Tregs絕對(duì)數(shù)和占淋巴細(xì)胞比率較對(duì)照組減少但無(wú)明顯差異(P>0.05)，高濃度組則顯著低于對(duì)照組(P<0.01)和低濃度組(P<0.05)。兩組肝移植受者CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Treg細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞的比率均與對(duì)照組無(wú)明顯差

5、異(P>0.05)。肝移植受者CD4+CD25+和CD4+FOXP3+占淋巴細(xì)胞比率與FK506血藥濃度呈顯著負(fù)相關(guān)([r=-0.479，P=0.003]和[r=-0.648，P<0.001])。在原發(fā)病為肝癌與非肝癌受者間Tregs水平無(wú)明顯差異(P>0.05)，F(xiàn)K506單用或FK506+霉酚酸酯(MMF)二聯(lián)免疫抑制治療方案間Tregs亦無(wú)明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論：1、肝移植受者在FK506維持免疫治療下肝功能長(zhǎng)期

6、穩(wěn)定時(shí)，外周血CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+ Treg細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量和占淋巴細(xì)胞比率較正常正常人群降低。2、肝移植受者肝功能長(zhǎng)期穩(wěn)定時(shí)，外周血CD4+CD25+和CD4+CD25+FOXP3+Treg水平與FK506血藥濃度有關(guān)，高血藥濃度受者Treg細(xì)胞數(shù)量和占淋巴細(xì)胞比率均顯著降低，低血藥濃度受者Treg水平雖有降低但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Treg細(xì)胞水平隨血藥濃度升高逐漸降低，兩者呈顯著負(fù)相關(guān)。3、肝移植受者肝功能長(zhǎng)期穩(wěn)