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文檔簡介
1、目的:探討不明原因早期復發(fā)性流產(UERM)與子宮內膜容受的相關性并探討相關分子機制。 方法:①應用光學顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡觀察種植窗期子宮內膜組織學形態(tài)及超微結構,并通過免疫組織化學分析種植因子LIF、Intergrinαvβ3、MUC-1、ER、PR表達,探討UERM與子宮內膜容受的相關性。②根據(jù)第一部分所得到的結論:UERM婦女子宮內膜表現(xiàn)為線粒體損傷及細胞凋亡率增加,結合文獻UERM患者子宮動脈血供下降,通過培養(yǎng)子
2、宮內膜容受性的理想模型細胞株(RL95-2),采用化學性低氧培養(yǎng)方法,在培養(yǎng)液中添加不同濃度Cocl2(0umol/L、30umol/L、62.5umol/L、125umol/L、250umol/L)觀察量效反應,并以明顯降低細胞活性的Cocl2濃度(62.5umol/L)培養(yǎng)細胞不同時間點(0h、12h、24h、48h),通過cck-8檢測細胞增殖活性,JC-1染色測線粒體膜電位以及流式細胞儀檢測細胞凋亡率,驗證缺氧是導致子宮內膜上皮
3、細胞線粒體損傷、細胞凋亡的原因。并探討隨著缺氧程度增加子宮內膜上皮細胞損傷及凋亡的趨勢。③通過PCR、Wester blot檢測凋亡相關因子HIF-1α、TWEAK及NF-kB在缺氧培養(yǎng)的RL95-2細胞的表達,并通過免疫組織化學分析UERM組和對照組子宮內膜TWEAK、HIF-1α蛋白表達比較,探討慢性缺血缺氧導致子宮內膜細胞凋亡的相關分子機制。 結果:⑴UERM患者子宮內膜組織形態(tài)黃體期缺陷(LPD)的發(fā)生率高于正常婦女;同
4、時胞飲突的發(fā)育(形態(tài)及密度)明顯滯后于正常婦女;透射電鏡發(fā)現(xiàn)UERM婦女子宮內膜線粒體損傷、細胞凋亡率明顯增加,上皮細胞及間質細胞炎性細胞浸潤;種植因子LIF、MUC-1、PR表達異常下降,而IntergrinαVβ3、ER表達無明顯異常。⑵隨著缺氧程度及缺氧時間增加,RL95-2細胞增殖活性降低,線粒體損傷及細胞凋亡率呈逐漸增加趨勢。⑶UERM患者子宮內膜TWEAK、HIF-1α表達明顯高于正常婦女,并且隨著缺氧時間增加,RL95-2
5、細胞株TWEAK、HIF-1αmRNA、蛋白表達呈逐漸增高的趨勢,NF-kB p65蛋白表達也逐漸增強。 結論:①UERM患者子宮內膜發(fā)育滯后;內膜上皮細胞線粒體損傷,細胞凋亡率增加;內膜種植因子LIF、MUC-1、PR表達下降;子宮內膜容受性調節(jié)網(wǎng)絡各標志物表達異常。②62.5umol/L Cocl2培養(yǎng)液培養(yǎng)6小時可以模擬RL95-2細胞缺氧模型;隨著化學性缺氧程度加重,RL95-2細胞增殖活性下降,細胞凋亡率增加。隨著化學
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