放射性肝損傷中細(xì)胞因子表達(dá)情況的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1建立單次不同劑量致兔放射性肝損傷的動(dòng)物模型，觀察放射性肝損傷的病理形態(tài)學(xué)變化及與劑量效應(yīng)關(guān)系，為肝癌的放射治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 2觀察放射性肝損傷肝組織細(xì)胞因子腫瘤壞死因子α（TNF-α）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、血小板源生長(zhǎng)因子（PDGF）、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）定位和表達(dá)情況，初步探討細(xì)胞因子與放射性肝損傷的關(guān)系，以及影響放射性肝損傷的發(fā)生因素，進(jìn)一步揭示放射性肝損傷的發(fā)病機(jī)理，為我們找到一條預(yù)防

2、、治療放射性肝損傷的新途徑提供部分實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1兔半肝放射性損傷動(dòng)物模型的制備：
　　 實(shí)驗(yàn)用兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A），照射組（B、C、D）共四組（每組5只）。用速眠新和氯胺酮1：1配比混合肌肉注射麻醉后，兔仰臥固定于木制兔臺(tái)，兔臺(tái)固定于治療床上的負(fù)壓真空墊內(nèi)，行CT定位掃描，掃描范圍從膈頂至肝臟下緣，并將CT定位掃描信息傳輸至TPS工作站中，以膽囊為界勾畫(huà)右半肝為放療靶區(qū)，55％等劑量曲線

3、為處方曲線，采用全身伽瑪?shù)?.5準(zhǔn)直器單次照射。B、C、D三組分別給予10Gy、15Gy和20Gy放射劑量。
　　 2放射性肝損傷病理形態(tài)學(xué)及細(xì)胞因子表達(dá)觀察：
　　 實(shí)驗(yàn)3個(gè)月末深度麻醉動(dòng)物后，分別于放療耙區(qū)中心（高劑量區(qū)）、放療耙區(qū)邊緣（低劑量區(qū)）、左半肝外側(cè)葉（未照射區(qū)）切取3塊1cm×1cm×1cm大小的肝組織。獲取標(biāo)本行HE染色，Masson染色比較觀察各組肝臟組織病理形態(tài)學(xué)變化。免疫組化法觀察 TNF-α、T

4、GF-β1、PDGF、CTGF定位和表達(dá)情況。
　　 3統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件分析。
　　 結(jié)果：
　　 1一般情況觀察：
　　 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，放療組的大白兔毛色晦暗，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，進(jìn)食進(jìn)水減少，易受驚，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢。
　　 2兔肝放射性損傷病理形態(tài)學(xué)觀察：
　　 肉眼觀：照射組肝臟體積縮小，邊緣變鈍，質(zhì)地較硬，顏色變淺，表面及切面呈灰黃色，膈面近中心處為著，表面粗糙觸之有結(jié)

5、節(jié)感，可見(jiàn)細(xì)顆粒狀結(jié)節(jié)。照射劑量越高，上述改變?cè)矫黠@。肝臟各葉間肉眼觀無(wú)顯著差別。
　　 HE染色及Masson染色光鏡觀：照射組可見(jiàn)中央靜脈及肝竇淤血，可見(jiàn)靜脈閉塞征（venous occlusive disease，VOD），肝細(xì)胞壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，小膽管增生，膠原纖維于匯管區(qū)、肝竇及中央靜脈周?chē)龆喑练e并向肝小葉內(nèi)肝索間及肝小葉間延伸。不同劑量組肝臟相同取材區(qū)隨放療劑量增大而顯著；相同劑量組肝臟不同取材區(qū)其改變隨未照射區(qū)、

6、低劑量區(qū)、高劑量區(qū)受照劑量的增大而呈加重趨勢(shì)。
　　 3細(xì)胞因子表達(dá)情況：
　　 照射后肝中細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF均顯著表達(dá)于肝臟纖維間隔，中央靜脈及匯管區(qū)周?chē)?xì)胞的胞漿中。隨著照射劑量的增加，不同放射劑量組肝臟相同取材區(qū)細(xì)胞因子的表達(dá)呈進(jìn)行性的增加，差異具有顯著性（P<0.05），且與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05）；相同放射劑量組肝臟不同取材區(qū)隨未照射區(qū)、低劑量區(qū)、高劑量區(qū)受照劑量

7、的增加進(jìn)行性增加，差異具有顯著性（P<0.05），且與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05、）。
　　 4組織病理學(xué)相關(guān)分析：
　　 總劑量與細(xì)胞因子的表達(dá)存在顯著的正相關(guān)（r=0.899，0.958，0.959，0.968，P<0.01），與膠原纖維含量（晚期放射性肝纖維化程度）也存在顯著的正相關(guān)（r=0.967，P<0.01）。即總劑量越高，細(xì)胞因子表達(dá)越高，肝纖維化程度越高。細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1、PDG

8、F、CTGF之間均存在顯著的相關(guān)性（r=0.810，0.863，0.866，0.821，0.899，0.804，P<0.01）。細(xì)胞因子的表達(dá)與膠原纖維含量（晚期放射性肝纖維化程度）呈顯著的正相關(guān)（r=0.892，0.848，0.942，0.764，P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.放射性肝損傷晚期其主要病理表現(xiàn)特征為：肝靜脈閉塞征（VOD）即中央小靜脈閉塞性病變和肝纖維化。隨放療劑量增加，肝靜脈閉塞、肝臟纖維化

9、及肝細(xì)胞、膽管損傷逐漸加重。提示肝臟受照射劑量是導(dǎo)致放射性肝損傷發(fā)生的重要因素。
　　 2.照射后肝組織中可見(jiàn)廣泛的TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF表達(dá)，且隨著放療劑量的增加細(xì)胞因子陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行性增強(qiáng)，肝損傷的病理改變進(jìn)行性加重；總劑量與細(xì)胞因子和肝纖維化程度顯著相關(guān)，提示TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF在促進(jìn)肝損傷的形成中可能起了重要的作用；劑量因素與放射性肝損傷發(fā)生的關(guān)系密切；放射性肝損傷的發(fā)生是多因

10、素影響和作用的結(jié)果。
　　 3 .TNF-α、TGF-β1、PDGF、CTGF表達(dá)分布相似，表達(dá)量具有相關(guān)性，且與病理上肝纖維化程度相平行，提示晚期放射性肝纖維化的形成是一個(gè)有多種細(xì)胞因子參與的復(fù)雜過(guò)程，細(xì)胞因子在肝纖維化的發(fā)生過(guò)程中彼此密切關(guān)聯(lián)，可能存在級(jí)聯(lián)反應(yīng)，協(xié)同促進(jìn)放射性肝纖維化進(jìn)行性進(jìn)展。
　　 4.照射野外發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子表達(dá)增高，與對(duì)照組差異有顯著性，因此認(rèn)為放射性肝損傷在一定時(shí)期可能并非局限于受照組織局部，局