肝素修飾改善去細胞化豬肝臟支架材料的生物相容性.pdf

1、目的:文章通過肝素修飾的方法，對改善作為組織工程支架材料的去細胞化豬肝臟的生物相容性進行了初步研究，以期望能將此方法用于改善組織工程肝臟材料的生物相容性，以及為其他血液接觸的組織工程材料改善生物相容性提供一個參考辦法。
　　方法:我們用不同的肝素修飾方法制作了不同種類的肝素化去細胞化豬肝臟支架材料。t-LBL(tissue immobilized with heparin by ionic binding vialayer-by-

2、layer self-assembly technique)支架材料是通過去細胞化豬肝臟支架經(jīng)肝素層層自組裝離子結(jié)合的方式完成的。t-MPA(tissueimmobilized with heparin by covalent binding via multi-point attachment)支架材料是通過去細胞化豬肝臟支架經(jīng)肝素多點連接共價結(jié)合的方式完成的。t-EPA(tissue immobilized with heparin

3、 by covalent bindingvia end-point attachment)支架材料是通過去細胞化豬肝臟支架經(jīng)末端連接共價結(jié)合的方式完成的。文章通過甲苯胺藍染色(Toluidine bluestaining)檢測、甲苯胺藍比色法(toluidine-blue colorimetric method)檢測、H&E染色(Hematoxylin Eosin staining)檢測、凝血時間檢測(coagulation time

4、tests)、血小板粘附實驗(Platelet adhesion)、血漿復(fù)鈣時間檢測(Plasma recalcification time)、材料上HepG2細胞培養(yǎng)實驗(Cell culture of HepG2)、MTT分析、溶血度檢測實驗(Haemolysisratio measurement)和掃描電鏡（scanning electron microscopy，SEM）檢測評估了肝素化去細胞化豬肝臟支架材料的肝素化效果、抗凝血

5、性能、細胞相容性。
　　結(jié)果:t-LBL，t-MPA和t-EPA肝素化去細胞豬肝臟支架材料擁有不同的肝素含量。肝素化的去細胞化豬肝臟支架材料比未肝素化的去細胞豬肝臟支架材料具有更好的抗凝血性能。和t-LBL，t-MPA肝素化去細胞支架材料比較，t-EPA肝素化去細胞支架材料擁有更多肝素、肝素釋放速度更慢而保留的肝素比例更多。和t-LBL，t-MPA肝素化去細胞豬肝臟支架材料比較，t-EPA肝素化去細胞豬肝臟支架材料的凝血酶時間(t

6、he thrombin time，TT)，凝血酶原時間(prothrombin time，PT)，活化部分凝血活酶時間(activatedpartial thromboplastin time，APTT)超出了設(shè)備測量范圍。而且，t-EPA肝素化去細胞豬肝臟支架材料的血漿復(fù)鈣時間是肝素修飾各組支架材料中最長的。t-EPA肝素化去細胞豬肝臟支架材料比對照、t-LBL和t-MPA更能促進HepG2細胞在材料上增殖、分布、聚集和伸展。

7、　　結(jié)論:通過末端(end-point attachment，EPA)連接肝素共價結(jié)合修飾的去細胞化豬肝臟支架材料較層層自組裝(layer-by-layerself-assembly technique，LBL)和多點結(jié)合(multi-point attachment，MPA)肝素化去細胞化豬肝臟支架材料獲得了良好的抗凝性和細胞相容性。鑒于在溫和的水溶液條件下完成肝素修飾的去細胞化豬肝臟支架材料制備和其在肝臟組織工程中擁有良好的抗凝性能