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1、目的:通過(guò)建立奧沙利鉑致CIPN的大鼠模型,觀察疼痛行為學(xué)變化、背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞病理學(xué)的改變、血清及背根神經(jīng)節(jié)中神經(jīng)生長(zhǎng)因子和其TrkA受體表達(dá)的變化,探討黃芪桂枝五物湯對(duì)奧沙利鉑所致慢性CIPN的干預(yù)作用及機(jī)制。
方法:選用45只成年Wistar雄性大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)后隨機(jī)分為空白組、模型組、中藥組??瞻捉M(n=15)予腹腔注射5%葡萄糖注射液2ml/kg,其余各組(n=15)按照4mg/kg,2ml/kg予奧沙利鉑腹腔注射,每
2、周2次。同時(shí)空白組、模型組予0.9%生理鹽水灌胃(1ml/次),每日1次,中藥組予黃芪桂枝五物湯2.48g/ml,10ml/kg灌胃,每日1次。奧沙利鉑用藥當(dāng)天,中藥在應(yīng)用奧沙利鉑前1小時(shí)灌胃。持續(xù)給藥至26天。每周稱重,每日觀察大鼠給藥后反應(yīng)。每周進(jìn)行Von Frey檢測(cè)和丙酮實(shí)驗(yàn)。第26天解剖每組大鼠,4%多聚甲醛心臟灌注,腹主動(dòng)脈采血,取雙側(cè)L4-L5背根神經(jīng)節(jié)。1、檢測(cè)奧沙利鉑及黃芪桂枝五物湯處理后各組大鼠血清中NGF-β水平的
3、變化。2、通過(guò)尼氏染色觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)的病理變化并測(cè)量神經(jīng)節(jié)核仁變化。采用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)中NGF-β及TrkA受體的表達(dá)情況。3、RT-PCR、qPCR檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)NGF-β及TrkA受體基因水平的變化。
結(jié)果:通過(guò)痛覺(jué)行為學(xué)測(cè)定和組織病理學(xué)檢測(cè)證實(shí)CIPN模型制備成功。機(jī)械疼痛閾值及冷痛覺(jué)結(jié)果示與空白組相比,模型組明顯下降(P<0.01),與模型組相比,中藥可減輕奧沙利鉑引起的機(jī)械疼
4、痛致敏(P<0.01),但其緩解冷痛覺(jué)致敏的作用無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。Elisa檢測(cè)發(fā)現(xiàn)奧沙利鉑可致血清NGF-β水平明顯降低(P<0.01),與模型組相比應(yīng)用黃芪桂枝五物湯則能使之明顯回升(P<0.05)。且各組血清NGF-β的含量與機(jī)械痛閾的變化成正相關(guān)。光鏡觀察各組間背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)和NGF-β、TrkA受體的表達(dá)情況。與空白組相比模型組核仁明顯縮小(P<0.01),應(yīng)用中藥后能減輕奧沙利鉑對(duì)核仁大小的影響(P<0
5、.01)。奧沙利鉑導(dǎo)致背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞NGF-β、TrkA受體表達(dá)下降(P<0.01),使用中藥后能糾正其表達(dá)的下調(diào)(P<0.01)。qPCR結(jié)果顯示,與空白組相比,應(yīng)用奧沙利鉑后大鼠背根神經(jīng)節(jié)NGF-β mRNA的表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)的趨勢(shì)而TrkA mRNA的表達(dá)則呈現(xiàn)上調(diào)(P>0.05),與模型組相比,黃芪桂枝五物湯可以上調(diào)NGF-β mRNA的表達(dá),而對(duì)TrkA的轉(zhuǎn)錄無(wú)影響(P>0.05)。
結(jié)論:黃芪桂枝五物湯在改善奧沙利鉑所
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