黃芪桂枝五物湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠免疫炎癥因子的影響.pdf

1、多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一種神經(jīng)中樞系統(tǒng)(Central nervoussystem，CNS)的自身免疫性疾病，主要病理改變?yōu)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的脫髓鞘病變。該病發(fā)病率高，致殘率高，病程漫長(zhǎng)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，多發(fā)性硬化癥的患病人數(shù)在世界人口約250萬(wàn)。中國(guó)目前沒(méi)有準(zhǔn)確的流行病學(xué)調(diào)查，但相關(guān)的文獻(xiàn)和案例報(bào)告，多發(fā)性硬化癥的發(fā)病人數(shù)在我國(guó)也逐年上升。目前臨床上西醫(yī)對(duì)MS的治療方案雖已得到共識(shí)，但仍無(wú)特效治療，臨

2、床療效不滿意，復(fù)發(fā)率、致殘率均高。近年來(lái)的實(shí)踐證明，中醫(yī)藥能有效改善神經(jīng)癥狀，緩解復(fù)發(fā)癥狀，減少發(fā)作次數(shù)，彌補(bǔ)西醫(yī)的不足。
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較研究的方法，觀察黃芪桂枝五物湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠基本情況、臨床癥狀、病理變化、免疫炎性調(diào)節(jié)等方面的影響效果，從而探討黃芪桂枝五物湯在多發(fā)性硬化中的免疫治療機(jī)制及療效，為多發(fā)性硬化臨床治療進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)研究證據(jù)。
　　方法:
　　1.按隨機(jī)原則把32只

3、SPF級(jí)6-8周齡Wistar雌性大鼠分成正常組、模型組、西藥組、中藥組4組，每組分別8只。
　　2.選用二次免疫法進(jìn)行造模。
　　3.在第1天造模的同時(shí)給予灌胃藥物。研究16天期間，各組大鼠每間隔24小時(shí)連續(xù)16天給予灌胃。其中正常組大鼠給予正常生理鹽水（2ml/只）灌服;模型組大鼠給予正常生理鹽水（2ml/只）灌服;西藥組大鼠給予醋酸潑尼松(1mg/kg)灌服;中藥組大鼠給予黃芪桂枝五物湯煎劑(11.88g/kg)灌服。

4、同時(shí)每間隔24小時(shí)連續(xù)16天觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、飲水量、進(jìn)食、體重、排泄量等情況，同時(shí)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。
　　4.各組大鼠于第17天采用過(guò)度麻醉方法處死，并收集外周血和腦組織，進(jìn)行組織病理、ELISA檢測(cè)IL-33及IL-35的含量、QPCR檢查TLR4的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.正常組未出現(xiàn)臨床損害癥狀。模型組8只大鼠于造模第2天后陸續(xù)發(fā)病，第3天逐漸出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀，第11天達(dá)到發(fā)病高峰，發(fā)病比為8/8，

5、死亡比為1/8。西藥組8只大鼠于造模第2天后逐漸發(fā)病，第3天開始出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀，第12天達(dá)到發(fā)病高峰，發(fā)病比為8/8，死亡比為0/8。中藥組8只大鼠于造模第2天后逐漸發(fā)病，第4天開始出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀，第14天達(dá)到發(fā)病高峰，發(fā)病比8/8，死亡比1/8。
　　2.治療后各組臨床癥狀神經(jīng)功能評(píng)分比較，正常組無(wú)癥狀，模型組評(píng)分最高。西藥組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組神經(jīng)功能評(píng)分低于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、(P＜0.05)。
　　3.治療后各組潛伏期比較，模型組潛伏期最短，發(fā)病最快，中藥組潛伏期最長(zhǎng)，發(fā)病時(shí)間最慢。西藥組潛伏期長(zhǎng)于模型組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;中藥組潛伏期長(zhǎng)于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中藥組潛伏期長(zhǎng)于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.治療后各組癥狀達(dá)高峰時(shí)間比較，模型組最短。西藥組、中藥組均長(zhǎng)于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中藥組長(zhǎng)于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P＜0.05)。
　　5.各組大鼠造模當(dāng)天體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后第11天、第16天各組大鼠體重比較，正常組最重，模型組及西藥組最輕。模型組、西藥組、中藥組均輕于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組重于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中藥組重于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);西藥組略低于模型組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.HE染色:正常組大鼠腦組織切

8、片未見異常。模型組腦和脊髓切片發(fā)現(xiàn)在白質(zhì)或白灰質(zhì)交界處可見小血管擴(kuò)張，部分小血管壁增厚，小血管周圍有炎性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)，形成血管袖套樣結(jié)構(gòu)，周圍神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)腫脹崩解呈碎片樣結(jié)構(gòu)。西藥組、中藥組與模型組對(duì)比，“袖套”狀結(jié)構(gòu)均有所減少，血管周圍炎性細(xì)胞明顯減輕，白質(zhì)內(nèi)見散在較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　7.治療后各組IL-33比較，正常組最低，模型組最高。模型組高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組、西藥組低于模型組，差異均有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);中藥組高于西藥組，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　8.治療后各組IL-35比較，正常組最高，模型組最低。模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);西藥組、中藥組均低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);西藥組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　9.治療后各組TLR4比較，正常組最低，模型組最高。模型組、西藥

10、組、中藥組均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);西藥組、中藥組均低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），西藥組低于中藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.Wistar大鼠通過(guò)二次免疫法成功建立EAE模型;EAE大鼠體重減輕，出現(xiàn)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)受損癥狀。
　　2.EAE大鼠潛伏期短，出現(xiàn)臨床癥狀后較快達(dá)高峰，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，外周血炎性細(xì)胞因子IL-33表達(dá)增多，IL-3