黃芪桂枝五物湯對(duì)奧沙利鉑致神經(jīng)病理性疼痛大鼠鈉離子通道蛋白及基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察化療藥誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠的疼痛行為學(xué)的變化、體重的變化、背根神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)的改變及背根神經(jīng)節(jié)鈉離子通道亞型Nav1.7蛋白及Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9基因的變化，探討中藥湯劑黃芪桂枝五物湯對(duì)奧沙利鉑致周圍神經(jīng)病理性疼痛大鼠的治療作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：選取45只成年的雄性WISTAR大鼠，并適應(yīng)性的喂養(yǎng)7天后，進(jìn)行隨機(jī)地分為三組，空白組、模型組及中藥黃芪桂枝五物湯高劑量組

2、。除空白組(n=15)予以腹腔內(nèi)注射5％的葡萄糖注射液2ml/kg外，其余2組(n=15)均按2ml/kg的劑量給予腹腔內(nèi)注射奧沙利鉑，2次/周。同時(shí)空白組及模型組給予0.9％的NaCl溶液進(jìn)行灌胃(2ml/次)，1次/日;中藥黃芪桂枝五物湯高劑量組則予中藥煎劑(10ml/kg)灌胃，1次/日。奧沙利鉑注射的當(dāng)天，中藥在奧沙利鉑注射前1小時(shí)內(nèi)灌胃。持續(xù)給藥至d25。每周注射奧沙利鉑前予以稱體重并測(cè)量機(jī)械疼痛閾值及冷痛覺(jué)丙酮實(shí)驗(yàn)，注射奧沙

3、利鉑后第二天再次檢測(cè)冷痛覺(jué)丙酮實(shí)驗(yàn)，并每天觀察大鼠的給藥后反應(yīng)、大便及飲食。D26解剖大鼠，予以心臟灌注，并摘取雙側(cè)的坐骨神經(jīng)、L4-5背根神經(jīng)節(jié)，行如下檢測(cè):1、通過(guò)病理尼氏染色光鏡下觀察大鼠L4-5背根神經(jīng)節(jié)的病理形態(tài)學(xué)變化，并測(cè)量大鼠的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的核仁大小變化;2、用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞膜蛋白Nav1.7的表達(dá)變化;3、用Western-blot的方法檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞膜蛋白Nav1.7的表達(dá)變化;

4、4、用RT-PCR及qPCR的方法檢測(cè)各組大鼠背根神經(jīng)節(jié)鈉離子通道Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9三個(gè)亞型的基因水平變化。
　　結(jié)果：通過(guò)對(duì)大鼠的機(jī)械疼痛閾值、冷痛覺(jué)丙酮實(shí)驗(yàn)等疼痛行為學(xué)和組織病理形態(tài)學(xué)的檢測(cè)證實(shí)了慢性周圍神經(jīng)病理性疼痛模型的成功制備。與空白組相比，模型組大鼠的體重明顯下降，其變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。從機(jī)械疼痛閾值的變化趨勢(shì)來(lái)看，與空白組相比，從第14天開始模型組出現(xiàn)了明顯的機(jī)械刺激痛，機(jī)械痛覺(jué)

5、閾值明顯下降(P＜0.01)，并隨著奧沙利鉑使用周期的延長(zhǎng)趨勢(shì)越明顯;與模型組相比，黃芪桂枝五物湯高劑量組明顯延緩了疼痛閾值的下降(P＜0.01)。從丙酮實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，模型組從第4天開始，即注射奧沙利鉑后2天開始，就出現(xiàn)丙酮冷刺激后的舔足或縮足，與空白組相比，模型組縮足或舔足次數(shù)明顯增加(P＜0.01)，而中藥組也減少了縮足或舔足的次數(shù)，但無(wú)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。尼氏染色的結(jié)果來(lái)看，與空白組相比，模型組的背根神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞尼氏

6、體明顯淡染，結(jié)構(gòu)紊亂，切核仁的體積縮小(P＜0.01)，黃芪桂枝五物湯高劑量組與模型組的相比同樣也有明顯的變化(P＜0.01)。免疫組化、WB及qPCR的結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠的背根神經(jīng)節(jié)鈉離子通道亞型Nav1.7蛋白及基因的表達(dá)明顯增加，黃芪桂枝五物湯高劑量組能夠下調(diào)使用奧沙利鉑后Nav1.7的升高。qPCR的結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Nav1.8、Nav1.9的mRNA表達(dá)水平均升高;與模型組相比