體外誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞分化為結(jié)膜上皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立體外培養(yǎng)人羊膜上皮細(xì)胞(HAECs)和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞的方法,通過將兩種細(xì)胞共培養(yǎng),觀察并檢測(cè)是否能將人羊膜上皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化為結(jié)膜上皮樣細(xì)胞。
　　方法:①分別采用酶消化法和組織塊法獲得HAECs和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞,并對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察;②將HAECs和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞在Transwell非接觸共培養(yǎng)系統(tǒng)中共培養(yǎng)10天,以誘導(dǎo)HAECs分化;③通過倒置顯微鏡和原子力顯微鏡對(duì)誘導(dǎo)前后的HAECs進(jìn)行形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)比較,

2、對(duì)誘導(dǎo)前后的HAECs進(jìn)行PAS染色、HE染色,免疫熒光法檢測(cè)誘導(dǎo)前后HAECs中CK4、MUC4、MUC5AC的表達(dá),實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)分化細(xì)胞MUC4、MUC5ACmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:共培養(yǎng)后的人羊膜上皮細(xì)胞和兔結(jié)膜上皮細(xì)胞形態(tài)較為相似,誘導(dǎo)后的HAECs中可見少量 PAS陽性細(xì)胞,細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)到誘導(dǎo)后HAECs中 CK4、MUC4、MUC5AC呈陽性表達(dá),qRT-PCR檢測(cè)到分化后細(xì)胞M