α-MSH對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的:氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡貫穿于早期糖尿病視網(wǎng)膜病變中。本研究的目的是檢測(cè)α促黑素細(xì)胞激素(α-MSH)在早期糖尿病視網(wǎng)膜病變中對(duì)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激和抗凋亡作用及其機(jī)制的探索。
　　方法:SD大鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病，然后玻璃體腔注射α-MSH進(jìn)行治療。在糖尿病第5周，取出視網(wǎng)膜進(jìn)行基因表達(dá)和活性氧簇分析。再1周后，取眼杯進(jìn)行透射電子顯微鏡掃描和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶dUTP缺口末端標(biāo)記染色。體外實(shí)驗(yàn)中視網(wǎng)膜血管

2、內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行高糖處理，用或不用α-MSH進(jìn)行干預(yù)。通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)O類叉頭框蛋白(FoxOs)的表達(dá)。在內(nèi)皮細(xì)胞中經(jīng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過表達(dá)FoxO4基因，再經(jīng)α-MSH和/或高糖處理，然后用CM-H2DCFDA和Annexin-Ⅴ分別對(duì)氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的水平進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:在糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜中，α-MSH治療可以正常化NO2-/NO3-和H2O2的水平。糖尿病大鼠組的NO2-/NO3-水平顯著增高，而糖尿病α-MSH治療組

3、可以將NO2-/NO3-水平正常化趨于正常水平(α-MSH治療組與正常組相比， p=0.324)。糖尿病大鼠的H2O2顯著增高，而糖尿病治療組可以顯著降低H2O2，使其降低到正常水平（α-MSH治療組與正常組相比，p=0.949）。α-MSH可以大幅地減少糖尿病視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的凋亡細(xì)胞數(shù)，（α-MSH治療組與DM組相比，P＜0.001）。α-MSH有效地改善超微結(jié)構(gòu)的病理?yè)p傷。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示在糖尿病視網(wǎng)膜中，eNO

4、S表達(dá)下調(diào)，iNOS，ICAM-1和TNF-α的表達(dá)上調(diào)，而這些基因表達(dá)的異常可以被α-MSH校正(α-MSH治療組與DM組相比，P＜0.1)。在糖尿病視網(wǎng)膜中檢測(cè)到FOXO4的表達(dá)上調(diào)，α-MSH糖尿病視網(wǎng)膜玻璃體腔注射組FOXO4的表達(dá)上調(diào)受到抑制，接近于正常水平（DM組與α-MSH+ DM組相比，P＜0.05;α-MSH+DM組與Normal組相比，P=0.03）。在體外實(shí)驗(yàn)暴露于高糖的內(nèi)皮細(xì)胞中，α-MSH可以抑制FOXO4的上

5、調(diào)。在視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞過量表達(dá)FOXO4基因，α-MSH失去其抗氧化應(yīng)激和抗凋亡的能力，證明α-MSH是通過抑制FOXO4基因的上調(diào)來(lái)實(shí)現(xiàn)其抗氧化應(yīng)激及抗凋亡的機(jī)制的。
　　結(jié)論:在早期糖尿病視網(wǎng)膜，α-MSH能正?；趸瘧?yīng)激水平，減少視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，有效改善糖尿病所導(dǎo)致的超微結(jié)構(gòu)的損傷，并糾正氧化應(yīng)激及炎癥相關(guān)基因表達(dá)的異常。α-MSH對(duì)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用可能是通過抑制高糖誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)錄水平上FOXO