多孔鈦表面非病毒載體介導(dǎo)的GFP基因組裝和生物學(xué)評價.pdf

1、種植體表面改性和基因治療相結(jié)合越來越引起研究者的關(guān)注,如何將基因組裝到種植體表面成為研究的熱點。
　　 本研究旨在通過層層靜電自組裝的方法,將編碼綠色熒光蛋白(GFP)基因組裝到種植體表面,實現(xiàn)種植體表面的基因引入。
　　 根據(jù)正負電荷相互吸引的原理,采用層層靜電自組裝(layer-by-layer assembly,LBL)的方法,將制備好的多孔純鈦片依次浸入帶正電荷的聚乙烯亞胺(polyethylene imine,

2、PEI)溶液、帶負電荷的透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)溶液、帶正電荷的脂質(zhì)體/GFP質(zhì)粒(lipid-DNA complex,LDc)溶液中,即可在鈦片表面組裝一層基因薄層,表示為:鈦片-PEI-(HA/LDc)1.將樣本重復(fù)浸入HA和LDc溶液中,可形成多層基因薄層,從而將編碼綠色熒光蛋白的GFP基因組裝到多孔純鈦表面。
　　 采用X射線光電子能譜(XPS)檢測鈦片表面元素的組成,未組裝的空白對照組鈦片檢測出

3、Ti、N、O和C元素,組裝5層的鈦片表面檢測不到Ti,出現(xiàn)了Na元素、S元素和P元素,N元素含量升高。采用場發(fā)射掃描電子顯微鏡(FSEM)觀察鈦片表面形貌,結(jié)果顯示組裝組鈦片表面出現(xiàn)球形顆粒,其直徑隨組裝層數(shù)增加逐漸增大。透射電鏡(TEM)檢測顯示,組裝的質(zhì)粒可以在磷酸鹽緩沖液中釋放,釋放出的LDc逐漸分離,降解為較松散狀,但仍有轉(zhuǎn)錄活性。采用接觸角測試儀對組裝的鈦片表面測試,與對照組相比有較好的潤濕性。
　　 將前成骨細胞MC

4、3T31-E1接種到組裝好的鈦片表面,觀察24h和72h的綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)染情況,計算轉(zhuǎn)染率,進行細胞毒性(MTT)測試與細胞形態(tài)觀察。
　　 結(jié)果顯示:組裝8層的24h的轉(zhuǎn)染率較其他組高,72h的轉(zhuǎn)染率普遍低于24h的轉(zhuǎn)染率,細胞毒性測試結(jié)果顯示,細胞毒性隨著組裝層數(shù)增加逐漸增大,但相對于空白對照組都顯示了較好的細胞活性和細胞形態(tài)。
　　 應(yīng)用LBL技術(shù)可以實現(xiàn)多孔純鈦表面GFP基因的組裝,該基因薄膜可以在不需外界任何