非病毒載體介導轉基因雞的初步研究.pdf

1、非病毒載體相比病毒載體具有一些優(yōu)勢：耐受性、相關的自身缺陷或誘導中和抗體反應性及載體構建利鑒定的簡便性。實驗利用流體力學注射法、肌肉注射法和睪丸注射法三種方法以非病毒載體進行轉基因雞研究，在基因治療、基因疫苗及轉基因雞生產上有一定的指導意義。
　　 1.流體力學注射法：10％體重pCAG-EGFP質粒(40～100μg)快速靜脈注射6～10日齡小公雞(10～15s內完成)。利用熒光顯微鏡觀察、PCR及免疫組化法鑒定8h、1d、3

2、d、5d心、肝、脾、肺、腎組織內EGFP基因的表達，結果顯示8h肝、脾、肺、腎均檢測到EGFP，但很快消失。并且8h心、肝、脾、肺、腎組織基因組DNAPCR檢測為陰性，說明EGFP未整合到雞基因組上。此方法對雞肝臟基因功能獲得或缺失快述研究提供了一個有力的工具。
　　 2.肌肉注射法：6～10日齡小公雞左腿肌肉注射pCAG-EGFP質粒40～100μg/只。利用熒光顯微鏡觀察、PCR和免疫組化法鑒定8h、1d、3d心、肝、脾、肺

3、、腎組織內EGFP基因的表達，結果顯示8h肝、腎組織內檢測到EGFP的表達，隨即消失。且其PCR結果為陰性，說明EGFP未整合到雞基因組上。此方法對快速簡便的基因治療提供了一種可能。
　　 3.睪丸注射法：18周齡體重相近、健康公雞睪丸內注射80μgpCAG-EGFP與脂質體混合物。轉染48h后，利用免疫組化法檢測睪丸組織內EGFP基因的表達，結果為陽性，說明EGFP基因在睪丸組織內成功地表達；但是30、60、70d精液PcR均