白斑綜合征病毒重組蛋白對克氏原螯蝦免疫效果的研究.pdf

1、本文通過口服、注射及浸泡三種免疫途徑研究了白斑綜合征病毒(WSSV)重組疫苗對動物模型克氏原鰲蝦(Procambarus clarkii)的免疫效果。采用原核(大腸桿菌BL<,21>)與真核(畢赤酵母GS115)表達系統(tǒng)分別表達了WSSV的兩個主要囊膜蛋白VP19和VP28，并以其作為重組疫苗研究抗WSSV效果。 以病毒基因組為模板采用PCR技術擴增了WSSV的囊膜蛋白VP19和VP28的基因，測序后登錄GenBank，接受號分

2、別為DQ007314和DQ007315。采用BLAST分別分析其與GenBank已登錄VPl9和VP28基因的同源性，同源性分別達98％和100％。原核表達系統(tǒng)中的表達產(chǎn)物用SDS-PAGE及WesternImmunoblotting進行檢測，均出現(xiàn)了明顯的特異性條帶，大小分別為21kDa(VP19)和28 kDa(VP28)，與預測一致。VP19和VP28在真核表達系統(tǒng)中也成功獲得表達，SDS-PAGE及Westem Immunobl

3、otting檢測其大小分別為22 kDa(VP19)和35kDa(VP28)。 分別純化VP19和VP28的原核及真核表達產(chǎn)物，并將其作為重組疫苗進行免疫效果的研究。采用三種免疫途徑：1)純化的蛋白與顆粒料混合均勻后，作為口服疫苗免疫鰲蝦25天；2)用330mM NaCl將純化的蛋白溶解后，進行皮下注射連續(xù)免疫；3)用330mM NaCl將純化的蛋白溶解后，進行浸泡連續(xù)免疫。經(jīng)口攻毒25天后，統(tǒng)計其死亡率。研究發(fā)現(xiàn)：1)通過注射

4、途徑免疫的鰲蝦相對存活率(RPS)最高，其次為口服和浸泡途徑；2)VP28單獨免疫組及VP19和VP28聯(lián)合免疫組的RPS與VP19單獨免疫組及對照組相比差異顯著(>60％)：3)真核表達系統(tǒng)所獲的重組疫苗與原核表達產(chǎn)物相比，經(jīng)免疫后RPS差異顯著(>60％)。通過以上研究表達明，經(jīng)免疫的方法預防與控制鰲蝦WSSV病毒病是可行的。今后還需深入研究病毒與宿主的相互作用機理以進一步形成規(guī)范的免疫程序，以及選擇更合適的表達系統(tǒng)來表達重組疫苗。