E-cadherin在進(jìn)展期胃癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的再表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：檢測(cè)進(jìn)展期胃癌原發(fā)灶及其轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中上皮型鈣粘蛋白（E-Cadherin，E-Cad）及其mRNA表達(dá)，探討E-cadherin與胃癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，從而為胃癌分子水平的診斷、治療提供依據(jù)及線索。
　　 方法：采用免疫組化過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素法（SP）觀察比較E-cadherin在38例進(jìn)展期胃癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的表達(dá)，同時(shí)用逆轉(zhuǎn)錄-多聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)上述標(biāo)本中E-cadherin基因水

2、平的變化，采用Western-blot法和流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)E-cadherin蛋白的表達(dá)量，并結(jié)合分化程度、組織學(xué)類(lèi)型等臨床病理因素進(jìn)行綜合分析。
　　 結(jié)果：（1）E-cadherin免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，E-cadherin染色定位于細(xì)胞膜，即連續(xù)的細(xì)胞膜染色。在38例患者中，E-cadherin在腫瘤原發(fā)灶只有2例正常表達(dá)，36例不正常表達(dá)，異常表達(dá)率為94.7％，E-cadherin在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)癌細(xì)胞中再表達(dá)陽(yáng)性

3、率為21.1％（8/38）。E-cadherin在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的再表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的分化程度密切相關(guān)，在高分化胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中再表達(dá)陽(yáng)性率為41.2％（7/17），在中低分化胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的表達(dá)陽(yáng)性率為4.76％（1/21），二者差異顯著（P<0.05）；E-cadherin在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的再表達(dá)陽(yáng)性率與胃癌腫瘤細(xì)胞的病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，在管狀及乳頭狀腺癌再表達(dá)陽(yáng)性率為22.72％（5/22），粘液腺癌的再表達(dá)陽(yáng)性率為

4、18.75％（3/16），兩者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）E-cadherin和β-actin引物的擴(kuò)增基因片段經(jīng)電泳和EB染色后可見(jiàn)清晰電泳條帶，其擴(kuò)增片段大小與所設(shè)計(jì)的大小完全一致，分別為252 bp、300 bp。E-cadherin mRNA在原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中的表達(dá)量分別為（0.737±0.010）和（0.745±0.009），兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。E-cadherin mRNA表達(dá)量相對(duì)值在中低分化及高分化

5、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中分別是（0.741±0.008）和（0.750±0.011），兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。E-cadherin mRNA表達(dá)量相對(duì)值在管狀及乳頭狀腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中是（0.748±0.010），在粘液腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中是（0.741±0.008），兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）38例胃癌患者原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)均檢測(cè)到不同程度的E-cadherin蛋白表達(dá)。通過(guò)Optimas6.0蛋白印記分析軟件對(duì)所有病例的蛋白條帶進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，E

6、-cadherin在原發(fā)癌組織中的蛋白相對(duì)強(qiáng)度為5～112.8（58.9±27.5），轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中蛋白相對(duì)強(qiáng)度為15～156.2（93.7±27.8），原發(fā)癌組織中E-cadherin蛋白表達(dá)相對(duì)強(qiáng)度低于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織。在中低分化和高分化轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cadherin蛋白相對(duì)強(qiáng)度分別為15～107.2（84.6±25.79）、45～156.2（105.2±42.3），二者間蛋白表達(dá)相對(duì)強(qiáng)度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在管狀及乳頭狀腺癌轉(zhuǎn)移

7、淋巴結(jié)中E-cadherin蛋白相對(duì)強(qiáng)度為16～156.2（102.2±27.8），粘液腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cadherin蛋白相對(duì)強(qiáng)度為15～103.9（82.7±22.1），二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（4）通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)胃癌原發(fā)灶及其轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌組織中E-cadherin蛋白表達(dá)量（X-Mode值）。原發(fā)癌組織中E-cadherin X-Mode值為（6.39±0.53），轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中E-cadherin x-Mode值為（9.

8、07±0.87），原發(fā)癌組織中E-cadherin X-Mode值低于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織。在中低分化和高分化轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cadherin X-Mode值分別為（8.82±0.73）、（9.4±0.95），二者間X-Mode差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在管狀及乳頭狀腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cadherin X-Mode值為（9.34.±0.86），粘液腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)E-cadherin X-Mode值為（8.65±0.70），二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。<

9、br>　　 結(jié)論：E-cadherin與胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；胃癌原發(fā)灶E-cadherin表達(dá)降低，而在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中出現(xiàn)高的再表達(dá)陽(yáng)癌性率，說(shuō)明原發(fā)灶的形成是由于E-cadherin表達(dá)降低或缺失造成的，而癌細(xì)胞在轉(zhuǎn)移部位的再聚集和生長(zhǎng)與E-cadherin再表達(dá)有關(guān)。這可能是蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)過(guò)程。通過(guò)RT-PCR、western-blot和流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)對(duì)E-cadherin在基因水平和蛋白水平的檢測(cè)，揭示E-cadh