E-cadherin、β-catenin在進(jìn)展期大腸癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)表達(dá)規(guī)律的臨床研究.pdf

1、目的:檢測(cè)進(jìn)展期大腸癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-鈣粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、β-連接素(β-catenin,β-cat)及兩者mRNA和蛋白的表達(dá),討論E-cadherin和β-catenin與大腸癌生物學(xué)行為的關(guān)系,尋求在分子水平對(duì)大腸癌早期診斷和治療更新、更有效的方法。
　　 方法:采用免疫組織化學(xué)染色S-P法分別檢測(cè)E-cad、β-cat在57例大腸癌組織(32例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶)及25例正常大腸粘膜中的表達(dá)情

2、況,并用免疫組化,蛋白免疫印記(Western Blot),逆轉(zhuǎn)錄-多聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)等方法聯(lián)合檢測(cè)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的32例大腸癌患者原發(fā)灶及相應(yīng)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cad、β-cat的表達(dá),探討兩者在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的再表達(dá)機(jī)理。
　　 結(jié)果:根據(jù)免疫組化染色結(jié)果,57例大腸癌組織中E-cad和β-cat的異常表達(dá)率分別為71.9％(41/57)和68.4％(39/57),與全部正常表達(dá)E-cad和β

3、-cat的正常大腸粘膜比較差異均顯著(P＜0.05),且兩者與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)(P＜0.05)。E-cad還與大腸癌的組織學(xué)類(lèi)型關(guān)系緊密(P＜0.05);β-cat與大腸癌的浸潤(rùn)深度密切相關(guān)(P＜0.05)。E-cad和β-cat在大腸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05),且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中起協(xié)同作用(P＜0.05)。
　　 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的32例大腸癌患者標(biāo)本原發(fā)灶及相應(yīng)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)E-cad、β-cat

4、的檢測(cè)結(jié)果:(1)免疫組化結(jié)果顯示:大腸癌原發(fā)灶中E-cad和β-cat的異常表達(dá)率分別為90.6％(29/32)和84.4％(27/32)。在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中,37.5％(12/32)E-cad再表達(dá)陽(yáng)性,43.8％(14/32)β-cat再表達(dá)陽(yáng)性,其中在高中分化腺癌E-cad和β-cat再表達(dá)陽(yáng)性率分別為55.6％(10/18)、61.1％(11/18),在低分化腺癌兩者的再表達(dá)陽(yáng)性率分別為14.3％(2/14)、21.4％(3/14

5、),差異均顯著(P＜0.05)。E-cad在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的再表達(dá)還與腫瘤細(xì)胞的組織學(xué)類(lèi)型有關(guān),在管狀及乳頭狀腺癌再表達(dá)陽(yáng)性率為57.1％(12/21),在粘液腺癌為0.9％(1/11),差異顯著(P＜0.05)。而β-cat的再表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。兩者的再表達(dá)均與腫瘤的浸潤(rùn)深度、大小、部位及患者年齡無(wú)關(guān)(P＞0.05)。而且,E-cad和β-cat在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)癌細(xì)胞中的再表達(dá)關(guān)系密切(P＜0.05)。(

6、2)Western Blot結(jié)果顯示:32例大腸癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中均檢測(cè)到不同程度的E-cad及β-cat蛋白表達(dá),通過(guò)Optimas6.0蛋白印記分析軟件對(duì)所有病例的蛋白條帶進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn),E-cad、β-cat在原發(fā)癌組織中各例蛋白相對(duì)強(qiáng)度分別為6～107(64.25±36.46)、5～89(33.9±25.44),在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中各例蛋白相對(duì)強(qiáng)度分別為13～149(84.41±36.75)、9～105(53.61±31.54

7、),轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中E-cad和β-cat蛋白相對(duì)強(qiáng)度均高于原發(fā)癌組織(P＜0.05),但均低于正常大腸粘膜(P＜0.05)。在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中,E-cad、β-cat在高中分化腺癌蛋白相對(duì)強(qiáng)度分別為28～127(98.56±36.09)、21～106(63.74±30.69),在低分化腺癌的蛋白相對(duì)強(qiáng)度分別為11～62(66.21±29.74)、7～49(35.69±25.10),二者間差異均顯著(P＜0.05)。管狀及乳頭狀腺癌轉(zhuǎn)移淋巴

8、結(jié)中E-cad蛋白相對(duì)強(qiáng)度高于粘液腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(P＜0.05)。而β-cat蛋白相對(duì)強(qiáng)度與組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。(3)RT-PCR結(jié)果顯示:E-cad、β-cat和β-actin引物的擴(kuò)增基因片段經(jīng)電泳和EB染色后可見(jiàn)清晰電泳條帶,其擴(kuò)增片段大小與所設(shè)計(jì)的大小完全一致,分別為250bp、200bp、300bp。E-cad mRNA和β-cat mRNA表達(dá)量相對(duì)值在大腸癌原發(fā)灶分別為(0.733±0.009)、(0.709±

9、0.011),均明顯低于正常大腸粘膜表達(dá)量(0.796±0.016)、(0.781±0.009)(P＜0.05);E-Cad mRNA和β-cat mRNA表達(dá)量相對(duì)值在大腸癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中分別為(0.739±0.010)、(0.728±0.007),均明顯高于大腸癌原發(fā)灶表達(dá)量(P＜0.05),但均低于正常大腸粘膜表達(dá)量(P＜0.05);結(jié)合臨床病理參數(shù)分析,高中分化腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cad mRNA和β-cat mRNA表達(dá)量相對(duì)值

10、高于低分化腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(P＜0.05),管狀及乳頭狀腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中E-cad mRNA表達(dá)量高于粘液腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)(P＜0.05),β-cat mRNA表達(dá)量與大腸癌組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。(4)通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)E-cad和β-cat蛋白相對(duì)熒光強(qiáng)度。原發(fā)癌組織中E-cad及β-cat蛋白相對(duì)熒光強(qiáng)度分別為(6.40±0.58)、(5.83±0.52),在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中則分別為(8.83±0.79)、(6.88±0.72

11、),原發(fā)癌組織中E-cad及β-cat蛋白相對(duì)熒光強(qiáng)度均低于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織(P＜0.05)。E-cad及β-cat蛋白相對(duì)熒光強(qiáng)度與腫瘤分化程度有關(guān)(P＜0.05),E-cad蛋白相對(duì)熒光強(qiáng)度還與腫瘤的組織學(xué)類(lèi)型有關(guān)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:E-cadherin和β-catenin與大腸癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān);大腸癌中普遍存在E-cad和β-cat的表達(dá)異常,兩者與大腸癌的惡性生物學(xué)表型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移緊密相關(guān),且兩者在大腸癌的

12、發(fā)展,轉(zhuǎn)移過(guò)程中有協(xié)同作用。E-cad和β-cat在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中出現(xiàn)高的再表達(dá)陽(yáng)性率,表明由于E-cad和β-cat的異常造成腫瘤細(xì)胞的粘附下降進(jìn)而脫離原發(fā)灶,而兩者在轉(zhuǎn)移部位的再表達(dá)促進(jìn)了癌細(xì)胞再聚集和生長(zhǎng)。這充分說(shuō)明了蛋白表達(dá)存在空間性和時(shí)間性。通過(guò)western-blot、RT-PCR和流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)對(duì)E-cad和β-cat在蛋白和基因水平的檢測(cè),揭示E-cad和β-cat在轉(zhuǎn)移灶中的再表達(dá)是由于基因水平改變?cè)斐傻?。E-cad和β