TLR-2、TLR-4、NF-kB在中耳膽脂瘤中的表達及意義.pdf

1、一.目的：
　　膽脂瘤型中耳炎是慢性中耳炎的一種常見類型,其主要特征表現(xiàn)為中耳腔內(nèi)大量增殖的角化鱗狀上皮和鄰近骨質破壞以,其中骨質破壞是其最主要的特征,能導致嚴重的顱內(nèi)、外并發(fā)癥,威脅患者生命。目前的研究尚未完全闡明膽脂瘤形成的確切機理。
　　本研究旨在分析Toll樣受體2(toll-like receptor2,TLR-2)和Toll樣受體4(toll-like receptor4,TLR-4)、核轉錄因子(Nuclear

2、 factor-kappa B,NF-kB)在中耳膽脂瘤中的表達及分布,分析TLR-2、TLR-4及NF-kB之間的相關性,探討TLR-2、TLR-4、NF-kB在中耳膽脂瘤炎癥反應過程中的作用。
　　二.材料與方法：
　　本實驗收集膽脂瘤型中耳炎病人手術中新鮮標本46例,其中15例膽脂瘤患者術中同時取外耳道正常皮膚,作為正常對照。所取標本經(jīng)10％福爾馬林固定后,制成石蠟切片。采用免疫組織化學技術(S P法)檢測TLR-2、

3、TLR-4及NF-kB在中耳膽脂瘤及外耳道皮膚中的表達,并采用計算機圖像分析系統(tǒng)對TLR-2、TLR-4及NF-kB染色結果進行定量分析。
　　三.結果：
　　1.TLR-2在膽脂瘤組織及正常外耳道皮膚中的表達TLR-2在46例膽脂瘤上皮組織中均呈中等陽性或強陽性反應,表現(xiàn)為棕黃色顆粒密布于上皮各層和上皮下基質細胞的胞漿中,包括基底細胞層、棘層、顆粒層、角質層,但陽性細胞的分布范圍和頻率各有不同,胞核無著色。在15例正常外耳

4、道皮膚組織中僅表達于上皮基底層。
　　2.TLR-4在膽脂瘤組織及正常外耳道皮膚中的表達TLR-4在46例膽脂瘤上皮組織中均呈中等陽性或強陽性反應,表現(xiàn)為棕黃色顆粒密布于上皮各層細胞的胞漿中,呈現(xiàn)從基底層向角質層染色逐漸增強的趨勢,胞核無著色。膽脂瘤上皮下可見成纖維細胞、單核.巨噬細胞、漿細胞、少數(shù)為淋巴細胞等散在的陽性細胞。15例正常外耳道皮膚組織中僅上皮基底層有弱陽性表達。
　　3.NF-kB在膽脂瘤組織及正常外耳道皮膚

5、中的表達NF-kB在46例膽脂瘤上皮組織中,NF-kB陽性細胞分布于上皮全層,不同膽脂瘤組織的陽性表達強度不等,多數(shù)標本呈強陽性表達;每例標本均有胞漿染色,部分標本胞核陽性著色。膽脂瘤上皮下炎性細胞及血管上皮細胞亦可見散在陽性表達。正常15例外耳道皮膚組織見表皮全層的弱陽性表達,均為胞質表達。
　　4.計算機圖像分析系統(tǒng)檢測TLR-2、TLR-4、NF-kB灰度值(1)TLR-2在46例膽脂瘤上皮組織中的灰度值為138.61±6.

6、20,在15例正常外耳道皮膚中的平均灰度值為95.64±6.20,兩者之間差異有統(tǒng)計學意義(t=20.73,p<0.05)。(2)TLR-4在46例膽脂瘤上皮組織中的灰度值為140.87±5.23,在15例正常外耳道皮膚中的平均灰度值為100.45±2.88,兩者之間差異有統(tǒng)計學意義(t=28.48,p<0.05)。(3)NF-kB在46例膽脂瘤上皮組織中的灰度值為155.25±11.72,在15例正常外耳道皮膚中的平均灰度值為95.6

7、5±8.12,兩者之間差異有統(tǒng)計學意義(t=17.96,p<0.05)。
　　5.經(jīng)spearman等級相關分析,膽脂瘤組織中TLR-2與NF-kB之間存在正相關關系(r=0.316,p<0.05);TLR-4與NF-kB之間存在正相關關系(r=0.389,p<0.01)。
　　四.結論：
　　1.TLR-2、TLR-4、NF-kB介導慢性炎癥反應和免疫應答反應,本研究結果顯示TLR-2、TLR-4、NF-kB在膽脂瘤

8、組織中的高表達,提示其在中耳膽脂瘤慢性炎癥反應過程中發(fā)揮有一定的作用。
　　2.TLR-2感受膽脂瘤炎癥微環(huán)境病原體表面的PAMPs刺激,經(jīng)由胞內(nèi)信號傳導通路,活化核因子NF-kB,NF-kB通過對多種基因表達的調(diào)控,調(diào)控眾多炎癥介質和細胞因子的表達,參與機體炎癥反應。本研究結果顯示TLR-2與NF-kB之間存在正相關關系,提示TLR-2與NF-kB可能在中耳膽脂瘤炎癥反應過程中有協(xié)同作用。
　　3.TLR-4感受膽脂瘤炎癥