2型糖尿病大鼠肝臟組織中Toll樣受體4和NF-KB的表達及意義.pdf

1、目的:Toll樣受體4(TLR4)是內(nèi)毒素(LPS)的關鍵受體,為Toll蛋白家族中的一個成員,是聯(lián)系固有免疫和適應性免疫的紐帶。TLR4主要表達于髓源性細胞,其啟動的胞內(nèi)信號轉導在肝損傷的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。核因子-KB(NF-κB)是廣泛存在于哺乳動物細胞中的一種重要轉錄調(diào)控因子,能與多種細胞基因的啟動子和增強子序列位點發(fā)生特異性結合,通過調(diào)控多種重要的細胞因子、粘附分子和趨化因子的表達,在機體的免疫應答、炎癥反應及細胞的

2、生長調(diào)控等方面發(fā)揮重要的作用,其活化也參與細胞增殖和凋亡的過程。本實驗通過建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,動態(tài)觀察TLR4和NF-κB在肝組織中的表達情況,探討免疫炎癥機制在2型糖尿病肝臟病變中的作用。
　　 方法:將清潔級SD大鼠隨機分為正常對照組(NC組),胰島素抵抗組(IR組),糖尿病4周組(DM4w組)和糖尿病8周組(DM8w組),均普通飼料喂養(yǎng)。IR組、DM4w組、DM8w三組連續(xù)7周按1ml/100mg體重/d給

3、予脂肪乳灌胃,NC組按同樣劑量給予水灌胃對照。第7周末測定血糖及胰島素,計算并比較各組胰島素水平,顯示脂肪乳灌胃組(即IR、DM4w、DM8w組)胰島素高于NC組。遂于次日清晨稱取動物體重,按30mg/kg體重尾靜脈注射STZ。3天后,血糖測定結果大于16.7mmol/l為2型糖尿病造模成功。造模后繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)和脂肪乳灌胃(0.5ml/100mg體重/d)。動物處死前股動脈取血,測定空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FPG)、糖化血

4、清蛋白(GSP)、血脂等生化指標。應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定大鼠肝臟組織胰島素受體,逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測大鼠肝臟組織TLR4 mRNA的表達,免疫組化測定肝臟組織中NF-κB蛋白的表達。所得數(shù)據(jù)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件分析。
　　 結果:高糖高脂飲食7周后,與對照組相比,脂肪乳灌胃三組血清胰島素升高明顯,差異有統(tǒng)計學意義,ISI明顯降低,HOMA-IR明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義；STZ誘導后,2型

5、糖尿病大鼠全部成模。實驗結束時,大鼠的ALT、AST、GSP于NC組、IR組、DM4w組、DMSw組中遞增,差異有統(tǒng)計學意義。DM4w組和DM8w組的FBG、TG、TC高于NC組和IR組,差異有統(tǒng)計學意義。與NC組比較,其他3組的FINS、LDL-c、FFA均高于NC組,而HDL-c均低于NC組,差異有統(tǒng)計學意義。ELISA法測定大鼠肝臟組織胰島素受體水平結果示,與NC組比較,IR組、DM4w組、DM8w組大鼠肝細胞膜胰島素受體水平升高

6、有統(tǒng)計學意義； RT-PCR檢測大鼠肝臟組織TLR4 mRNA的表達結果示,TLR4 mRNA表達水平于NC組、瓜組、DM4w組、DM8w組中遞增,差異有統(tǒng)計學意義。免疫組化測定肝臟組織中NF-κB蛋白的表達結果示,NF-κB蛋白的表達水平亦于NC組、瓜組、DM4w組、DM8w組中遞增,差異有統(tǒng)計學意義。Pearson相關分析示,TLR4 mRNA與NF-κB蛋白表達、ALT、AST均呈正相關。NF-κB蛋白表達與ALT、AST呈正相關

7、。
　　 結論:
　　 (1)脂肪乳灌胃(高糖高脂飲食)7周加小劑量一次尾靜脈注射STZ可以成功誘導SD大鼠的2型糖尿病模型,方法可靠,可全部成模；
　　 (2)胰島素抵抗和2型糖尿病大鼠肝細胞膜上的胰島素受體數(shù)目增多,可能與胰島素敏感性及作用下降有關；
　　 (3)隨著糖尿病的進展,肝臟組織中TLR4及NF-κB的表達水平增加,且與肝臟組織的損害呈正比,證實TLR4/NF-κB信號通路的炎癥反應在2型糖