應用代謝組學策略研究茉莉酸甲酯對三七不定根次生代謝產(chǎn)物的影響.pdf

1、三七是我國特有的貴重藥材之一，也是國際市場上的暢銷植物藥，具有活血化瘀、鎮(zhèn)靜止痛、滋補強壯等功效。由于生長緩慢和地理條件的限制以及市場需求的不斷擴大，導致資源供不應求。為了緩解日益突出的資源短缺和需求量增加之間的矛盾，利用代謝組學策略評價優(yōu)化三七組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)大量三七活性次生代謝產(chǎn)物成為當務之急。本實驗室已經(jīng)建立了三七不定根液體培養(yǎng)體系。因此，研究優(yōu)化三七不定根組織培養(yǎng)生產(chǎn)大量次生代謝產(chǎn)物具有可行性和迫切性。本文首先建立了基于UPLC

2、-MS的代謝組學分析方法，然后分別分析比較了茉莉酸甲酯刺激的三七不定根，三七不定根，大田三七根和花蕾之間的次生代謝差異，初步證明了茉莉酸甲酯作為誘導劑的有效性，進一步研究了茉莉酸甲酯對三七不定根的影響，為繼續(xù)深入研究奠定了基礎。 研究結果如下： 1. 首次建立了UPLC-MS和PCA，PLS-DA結合的分析方法對三七次生代謝產(chǎn)物進行研究。與傳統(tǒng)高效液相色譜法相比，該方法全面、快速、高效而且方法的線性范圍、回收率、日內(nèi)日間

3、精密度和穩(wěn)定性均符合分析天然產(chǎn)物的測定要求。多維統(tǒng)計方法的應用，能夠更加準確的從三七次生代謝輪廓中找出關鍵活性物質，評價三七不定根。 2. 首次利用建立的代謝組學分析方法研究三七不定根，茉莉酸甲酯刺激三七不定根，三七根和三七花蕾的次生代謝產(chǎn)物的差異，從而評價茉莉酸甲酯作為誘導劑對三七不定根的作用。發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯對三七不定根次生代謝產(chǎn)物合成的影響非常明顯，且合成的次生代謝產(chǎn)物的比例與大田三七更加相似，確定了進一步研究的意義。

4、 3. 研究茉莉酸甲酯對三七不定根的最佳刺激時間和加入量，并深入研究了隨時間變化，茉莉酸甲酯對三七不定根生長和次生代謝產(chǎn)物合成的影響。根據(jù)PCA得分圖上的分布發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)21天時加入400μmol/L的茉莉酸甲酯第七天能夠達到最佳的刺激次生代謝產(chǎn)物合成的作用。同時根據(jù)PLS-DA的分析結果發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯明顯刺激皂苷類次生代謝產(chǎn)物的合成，且對二醇型皂苷合成的作用（如人參皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd）大于對三醇型皂苷的作用，部分三醇型皂苷的