多效因子對培養(yǎng)葡萄細胞及其次生代謝產物的影響.pdf

1、白藜蘆醇是一種植物抗毒素(phytoalexin)，具有抗氧化、抗自由基活性、降血脂、抗腫瘤、抗誘變、抗衰老等作用。本論文首次采用植物組織培養(yǎng)和細胞懸浮培養(yǎng)技術篩選出一種白藜蘆醇含量較高的葡萄細胞系，系統(tǒng)地研究了營養(yǎng)和環(huán)境因子對該細胞系的影響，比較了從搖床到反應器放大培養(yǎng)過程中細胞的生長和白藜蘆醇積累情況，并就大規(guī)模生產條件下培養(yǎng)體系中細胞生長與接種量、溶解氧和剪切力等因子間的關系進行了探討。 以葡萄皮為外植體，在MS培養(yǎng)基中添

2、加NAA 6.0mg/L+6-BA 0.6mg/L，有利于培養(yǎng)材料成活率的提高和愈傷組織的形成。每21天左右繼代一次，愈傷組織生長良好。用繼代培養(yǎng)7-10天的愈傷組織進行液體培養(yǎng)，每15天繼代一次，懸浮細胞增殖迅速。 葡萄細胞系Jf01在搖瓶培養(yǎng)和生物反應器培養(yǎng)中均保持了其母株生長速度快、分散性好的優(yōu)點，并且白藜蘆醇的合成能力也有了明顯提高，是一種高產優(yōu)質細胞系。 Jf01細胞系在一定范圍內對環(huán)境因子的變化不敏感，具有較

3、強的耐受性。其生長的最適蔗糖濃度為30g/L；最適pH值為5.8(滅菌前)；最適攪拌轉速為150rpm；最適接種量為l00-150g/L鮮重。細胞在增殖階段對溶解氧具有一定的濃度要求，耗氧高峰在培養(yǎng)初期。攪拌轉速增加時，剪切力隨之增大，細胞團聚集的細胞數(shù)減少，引起細胞變形、破碎，生物量的積累受到抑制甚至下降并導致細胞溶解和白藜蘆醇合成的減少。 在搖瓶培養(yǎng)和生物反應器培養(yǎng)過程中，Jf01細胞系的生長狀況和白藜蘆醇合成均未發(fā)生顯著改