草履蟲對(duì)海藻內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的抗性研究.pdf

1、草履蟲是原生動(dòng)物纖毛綱中的一種極其具有代表性意義的原生動(dòng)物。它具有許多的特點(diǎn)，研究者們常常喜歡用它作為檢測(cè)試劑生物活性的對(duì)象生物。第一，草履蟲存在范圍比較廣，能夠比較容易并且方便的采集到;第二，草履蟲的生命力對(duì)比其他單細(xì)胞動(dòng)物較強(qiáng)，更容易培養(yǎng)起來(lái);第三，草履蟲的個(gè)體比其他單細(xì)胞動(dòng)物的個(gè)體較大，這樣更容易研究與觀察;第四，草履蟲反應(yīng)比較靈敏，相比于其他復(fù)雜的多細(xì)胞生物，草履蟲對(duì)毒性物質(zhì)的反應(yīng)更為敏銳，減少了反應(yīng)時(shí)間，能夠更直觀、準(zhǔn)確的反應(yīng)

2、出化合物的毒性;第五，相比于一般的化學(xué)方法的呆板，草履蟲作為反應(yīng)對(duì)象能夠更加的形象并且生動(dòng)有效的體現(xiàn)反應(yīng)的過(guò)程和結(jié)果。海洋微生物跟大陸微生物的生存環(huán)境存在著非常迥異的差別，具有低溫、高壓、缺氧、高溫等特點(diǎn)，使海洋微生物產(chǎn)生了跟大陸微生物完全迥異的奇特并且又很繁雜的代謝方式、適應(yīng)環(huán)境的方式和生存繁殖的方式，從而代謝產(chǎn)生了許多化學(xué)構(gòu)造特別并且有著多種生物活性的次生代謝產(chǎn)物。因此它的次生代謝產(chǎn)物有著非常重大的研究意義。
　　本文對(duì)分離自

3、綠藻刺松藻(Codium fragile)和金膜藻(Chrysymenia wrightii)的兩株真菌長(zhǎng)枝木霉(Trichoderma Longibrarachiatum)和集峰曲霉(Aspergillus nomius)選用了不同的培養(yǎng)基進(jìn)行了規(guī)模發(fā)酵，分離純化了這兩株菌的次生代謝產(chǎn)物，并且對(duì)所得的大部分化合物進(jìn)行了草履蟲抗性研究。次生代謝產(chǎn)物采用了硅膠柱層析、凝膠Sephadex LH-20柱層析、重結(jié)晶、制備薄層層析、高效液相色

4、譜等分離純化方式，一共得到了10個(gè)單體化合物，綜合運(yùn)用現(xiàn)代波譜技術(shù)（1H-NMR、13C-NMR、DEPT等）、化學(xué)方法及與已報(bào)道的文獻(xiàn)比對(duì)對(duì)各個(gè)單體化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。對(duì)所得化合物進(jìn)行草履蟲抗性實(shí)驗(yàn)，從長(zhǎng)枝木霉(Trichoderma Longibrarachiatum)分離到的5α，8α-環(huán)氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為1.958μg/mL，麥角-7，22-二烯-3β,5α，6β-三醇對(duì)草履蟲24

5、h半致死濃度為2.108μg/mL，β-谷甾醇對(duì)草履蟲的24h半致死濃度為1.907μg/mL，5-羥基-3-甲基戊-2-烯酸對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為5.613μg/mL，harziane二萜對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為1.153μg/mL。從集峰曲霉(Aspergillus nomius)分離到的5α，8α-環(huán)氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為1.907μg/mL，(24R)-24-甲基膽甾4，2

6、2-二烯-3-酮對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為2.827μg/mL，豆甾-4，22-二烯-3-酮對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為2.376μg/mL，豆甾-4-烯3-酮對(duì)草履蟲的24 h半致死濃度為2.245μg/mL。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，海藻內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物對(duì)草履蟲具有毒殺作用，并且在一定的范圍內(nèi)致死率與化合物濃度呈現(xiàn)出線性關(guān)系，其中萜類化合物對(duì)草履蟲的毒殺作用最強(qiáng)，甾體類化合物對(duì)草履蟲的毒殺性大于酮類化合物，草履蟲對(duì)5-羥基-3-甲基