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1、目的:通過(guò)基因沉默方法研究缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)特異性小干擾RNA(siRNA)重組質(zhì)粒pSUPER<'siHIF-1α>對(duì)小鼠視網(wǎng)膜HIF-1α表達(dá)及視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法:(1)構(gòu)建HIF-1α特異性siRNA重組質(zhì)粒pSUPER<'siHIF-1α>。(2)選擇7d齡C57BL/6J小鼠48只,其中12只為正常組(A組);另36只按照Smith<'[1]>的方法建立氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管模型,并隨機(jī)分
2、為:對(duì)照組(B組)、空載體組(C組)和基因治療組(D組),每組12只。于出艙前1d,向空載體組小鼠玻璃體腔注射pSUPER空載體質(zhì)粒;基因治療組注射重組質(zhì)粒pSUPER<'siHIF-lα>。(3)采用FITC-Dextran熒光造影視網(wǎng)膜鋪片觀察4組小鼠視網(wǎng)膜血管形態(tài)變化。(4)RT-PCR檢測(cè)各組視網(wǎng)膜組織中HIF-1αmRNA的表達(dá)水平。(5)SP免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組間HIF-1α蛋白質(zhì)的表達(dá)差異。 結(jié)果: (1)熒光造影
3、視網(wǎng)膜鋪片顯示,A組整個(gè)視網(wǎng)膜血管分布呈均勻網(wǎng)狀;B、C組視網(wǎng)膜中周部可見(jiàn)大片無(wú)灌注區(qū),見(jiàn)新生血管叢,伴熒光滲漏;D組無(wú)灌注區(qū)及新生血管叢較B、C組明顯減少,視網(wǎng)膜血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)基本正常。(2)RT-PCR結(jié)果顯示,B、C組視網(wǎng)膜HIF-1αmRNA表達(dá)較A組明顯上調(diào),而D組視網(wǎng)膜組織中HIF-1αmRNA表達(dá)較B組下調(diào),抑制效率為57.1%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(3)免疫組織化學(xué)染色顯示,HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核,
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