NOS在缺氧胎鼠組織中的表達(dá)及當(dāng)歸保護(hù)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)在宮內(nèi)缺氧狀態(tài)下胎鼠骨髓、軟骨、神經(jīng)組織中的表達(dá)，以及中藥當(dāng)歸注射液(Angelica injection)對(duì)宮內(nèi)缺氧組織的保護(hù)作用，為臨床宮內(nèi)缺氧的治療和愈后評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并為生育控制和妊娠疾病的研究、診斷及治療提供新的思路和手段。方法：(1)動(dòng)物分組及飼養(yǎng)：將6只雌性Wistar大鼠分別與雄鼠合籠飼養(yǎng)，于次晨發(fā)現(xiàn)陰栓者記為懷孕0天，記下日期，

2、單獨(dú)飼養(yǎng)雌鼠至19天孕期。將6只孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、缺氧組和當(dāng)歸組，每組2只。(2)缺氧動(dòng)物模型建立：將對(duì)照組孕鼠經(jīng)尾靜脈緩慢注射0.9％生理鹽水(8ml/kg體重)1小時(shí)后脫頸處死，快速剖腹取出胎鼠(每只孕鼠產(chǎn)胎鼠5~8只)，剔除子宮壁、羊膜等后,中性福爾馬林固定；將缺氧組孕鼠經(jīng)尾靜脈緩慢注射0.9％生理鹽水(8ml/kg體重)，建立缺氧模型致胎鼠宮內(nèi)缺氧1小時(shí)后復(fù)氧1小時(shí)，再用與對(duì)照組相同的方法取材固定；當(dāng)歸組孕鼠用25％的當(dāng)歸注射

3、液(8ml/kg體重)代替生理鹽水，其余與缺氧組相同。(3)石蠟切片和免疫組化實(shí)驗(yàn)：每小組選10個(gè)胎鼠整胎作石蠟橫切片，每個(gè)標(biāo)本選取相鄰4張切片間隔作HE染色及神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)免疫組化反應(yīng)。(4)圖像分析和統(tǒng)計(jì)分析：選取三組中均含有骨髓、神經(jīng)組織、軟骨組織切片各3張，每張切片用GD—8病理彩色圖像分析系統(tǒng)，在400倍下進(jìn)行圖像分析，每張切片5個(gè)視野，由計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)測(cè)定各組免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的光密度，數(shù)據(jù)用SAS軟件統(tǒng)計(jì)分析

4、，結(jié)果以X±S表示。結(jié)果：1、免疫組化染色：(1)對(duì)照組：少數(shù)骨髓中有核紅細(xì)胞、神經(jīng)組織中神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)染淺棕色，軟骨組織中軟骨囊染淺棕色；(2)缺氧組：骨髓中有核紅細(xì)胞、軟骨組織中軟骨細(xì)胞胞質(zhì)、軟骨囊均染成棕色，神經(jīng)組織中神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)染成深棕色；(3)當(dāng)歸組：三種細(xì)胞胞質(zhì)均染成棕色。2、免疫組化染色圖像分析：三種組織中缺氧組nNOS含量均較對(duì)照組、治療組明顯增加(P<0.05)，治療組nNOS含量比缺氧組明顯減少(P<0.05)。結(jié)論：

5、(1)通過(guò)孕鼠缺氧成功建立宮內(nèi)胎鼠缺氧模型；(2)對(duì)照組骨髓、神經(jīng)組織中少量有核紅細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)、軟骨囊有nNOS活性，提示nNOS激活產(chǎn)生適量NO對(duì)胚胎發(fā)育起著生理調(diào)節(jié)作用；(3)孕鼠缺氧1小時(shí)引起宮內(nèi)胎鼠骨髓、軟骨、神經(jīng)組織中nNOS活性增強(qiáng)，提示nNOS廣泛存在于機(jī)體各組織，其過(guò)量表達(dá)可能是宮內(nèi)缺氧時(shí)引起胚胎多種組織細(xì)胞，特別是神經(jīng)組織損傷的重要機(jī)制之一。(4)應(yīng)用中藥當(dāng)歸注射液后，骨髓、神經(jīng)組織、軟骨組織中陽(yáng)性細(xì)胞的nNOS