當歸對缺糖缺氧培養(yǎng)心肌細胞保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：為觀察當歸對缺糖缺氧損傷的體外培養(yǎng)心肌細胞的保護作用，建立缺糖缺氧心肌細胞損傷模型，通過生化檢測及組織化學和電鏡觀察等方法進行實驗研究，初步探討了當歸對體外培養(yǎng)心肌細胞的保護作用。
　　方法：將Wistar系大鼠乳鼠心肌細胞原代單層培養(yǎng)至5-7天，取生長良好的培養(yǎng)瓶隨機分為正常對照組、模型組、藥物對照組（人參皂甙）及實驗組（當歸，0.7mg/ml，0.5mg/ml，0.3mg/ml劑量，經(jīng)篩選0.5mg/ml為最適宜濃度）。

2、正常對照組：每隔三天更換培養(yǎng)液；模型對照組為N2飽和缺氧培養(yǎng)基培養(yǎng)；藥物對照組為N2飽和缺氧培養(yǎng)基加0.3mg/ml人參皂甙培養(yǎng)；實驗組為 N2飽和缺氧培養(yǎng)基加0.5mg/ml當歸提取物繼續(xù)培養(yǎng)。將各組均置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12小時，取出培養(yǎng)瓶內(nèi)生長細胞蓋玻片，采用組織化學、生化檢測及透射電鏡等方法觀察培養(yǎng)心肌細胞形態(tài)學變化,超微結構以及生化檢測數(shù)據(jù)的變化.
　　結果：組織化學觀察結果：正常對照組心肌細胞PAS反應強，糖

3、原顆粒多,染色深；SDH活性較強，細胞質(zhì)內(nèi)藍紫色顆粒較多，染色較深；ACP活性較弱，細胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒較少，染色淺。模型對照組心肌細胞PAS反應明顯減弱，糖原顆粒明顯減少，染色淺；SDH活性明顯減弱，細胞質(zhì)內(nèi)藍紫色顆粒明顯減少，染色較淺；ACP活性明顯增強，細胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒明顯增多，染色深。與模型對照組相比實驗組及藥物對照組心肌細胞PAS反應明顯增強，糖原顆粒明顯增多，染色較深；SDH活性明顯增強，細胞質(zhì)內(nèi)藍紫色顆粒明顯增多，染色較深

4、；ACP活性減弱，細胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒減少，染色較淺。
　　生化檢測結果：模型對照組 SOD活性較正常對照組明顯降低，MDA含量明顯升高,藥物對照組及實驗組SOD活性較模型對照組明顯增強，MDA含量明顯降低（p＜0.01）
　　透射電鏡觀察結果:正常對照組各種細胞器結構清晰，損傷組心肌細胞質(zhì)內(nèi)，線粒體明顯變性、腫脹，嵴斷裂，雙層膜結構不清，并見大量脂滴沉積，糖元顆粒明顯減少。但是，藥物組與藥物對照組的心肌細胞內(nèi)上述細胞損傷變化