NMDA受體激活在宮內(nèi)缺氧胎鼠肺發(fā)育受阻中的作用.pdf

1、第一章宮內(nèi)缺氧對(duì)胎鼠發(fā)育的影響 目的:建立宮內(nèi)缺氧模型，觀察宮內(nèi)缺氧對(duì)胎鼠發(fā)育的影響，重點(diǎn)了解對(duì)胎鼠肺發(fā)育的影響。 方法: 1.動(dòng)物模型的制備及實(shí)驗(yàn)分組通過(guò)降低母鼠吸入氧濃度至10.5±1.0％，每天持續(xù)缺氧8小時(shí)，建立宮內(nèi)缺氧的模型。實(shí)驗(yàn)分組為：空氣對(duì)照組，缺氧2天組，缺氧6天組和缺氧10天組。于孕21天剖宮后對(duì)胎鼠進(jìn)行相關(guān)檢查。 2.一般情況相關(guān)檢查記錄孕鼠體重、胎鼠體重、胎鼠個(gè)數(shù)、存活率、胎心（右心

2、室/左心室+室間隔即RV/LV+S）等。 3.胎盤組織病理學(xué)檢查留取空氣對(duì)照組及各缺氧對(duì)照組胎盤連同臍帶及血管兩例，選擇標(biāo)準(zhǔn)是該組重量最大和最小者，進(jìn)行病理學(xué)相關(guān)檢查。 4.肺組織相關(guān)檢查所有胎鼠進(jìn)行肺濕重稱量，取部分胎肺左葉作HE染色、輻射狀肺泡計(jì)數(shù)（RAC）、肺小動(dòng)脈外徑、管壁厚度、管壁厚度/肺小動(dòng)脈外徑（WT％）、血管總面積、管壁面積、管壁面積/總面積（WA％）檢測(cè)。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表

3、示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）及SNK-q檢驗(yàn)。p<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1.胎鼠存活率隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)動(dòng)物的存活率降低。 2.胎鼠情況不同缺氧天數(shù)的胎鼠體重明顯低于空氣對(duì)照組，隨缺氧天數(shù)增加而進(jìn)一步降低，右心室/左心室+室間隔（RV/LV+S）均明顯高于空氣對(duì)照組，不隨缺氧天數(shù)增加而進(jìn)一步增加。 3.胎肺情況胎肺重量在宮內(nèi)缺氧2天組即明顯降低，隨宮內(nèi)缺氧天

4、數(shù)的增加進(jìn)一步降低。肺重/體重的比值在缺氧2天組明顯降低，隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的增加有增加。 4.胎盤組織HE染色空氣對(duì)照組胎盤絨毛結(jié)構(gòu)正常，各缺氧組與對(duì)照組無(wú)差異，臍動(dòng)脈各缺氧組與對(duì)照組間無(wú)差異。 5.胎肺組織HE染色空氣對(duì)照組肺泡結(jié)構(gòu)規(guī)則，排列有序，肺泡間隔分布均勻，肺泡腔未見明顯滲出。隨著缺氧天數(shù)增加，肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則，排列紊亂，肺泡間隔分布不均勻，肺泡腔見明顯滲出。空氣對(duì)照組肺小動(dòng)脈管壁較薄、管腔較大，缺氧10天組肺小動(dòng)

5、脈管壁增厚、管腔狹窄。 6.輻射狀肺泡計(jì)數(shù)（RAC）缺氧2天組即明顯降低，隨宮內(nèi)缺氧天數(shù)的增加進(jìn)一步降低。7.肺血管形態(tài)測(cè)定隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)肺血管形態(tài)變化，缺氧10天組，其管壁面積/總面積（WA％）、管壁厚度（um）、管壁厚度/肺小動(dòng)脈外徑（WT90）的p<0.01。 結(jié)論: 1.成功建立大鼠宮內(nèi)缺氧模型。 2.宮內(nèi)缺氧，胎鼠發(fā)育受限、胎肺發(fā)育不良：并隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，胎鼠發(fā)育受限進(jìn)一步加重。

6、 第二章 MK-801對(duì)不同宮內(nèi)缺氧所致胎鼠肺發(fā)育受阻的作用 目的:檢測(cè)對(duì)照組及各缺氧組胎肺組織NMDAR表達(dá)情況，并觀察NMDA受體拮抗劑（MK-801）對(duì)宮內(nèi)缺氧下胎鼠發(fā)育的作用。 方法: 1.動(dòng)物模型的制備及實(shí)驗(yàn)分組動(dòng)物模型同第一章。實(shí)驗(yàn)分組為：空氣對(duì)照組，空氣+MK-801組，缺氧對(duì)照組，缺氧+MK-801組。 2.胎肺組織NMDARmRNA表達(dá)對(duì)空氣對(duì)照組及各缺氧對(duì)照組部分肺組織進(jìn)行RN

7、A的提取，進(jìn)行NMDA1及2A、B、C、D受體mRNA的Real Time-PCR測(cè)定（由上海閃晶公司完成）。 3.一般情況相關(guān)檢查同第一章。 4.胎盤組織病理學(xué)檢查同第一章。 5.肺組織相關(guān)檢查同第一章。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）及SNK-q檢驗(yàn)。p<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1.胎肺組織NMDAR表達(dá)

8、空氣對(duì)照組，胎鼠肺組織以NMDAR2D表達(dá)為主；隨著宮內(nèi)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，胎肺組織各NMDAR表達(dá)均增高，于缺氧6天表達(dá)最高，其中NMDAR2D表達(dá)最顯著；在缺氧10天，肺組織各NMDAR表達(dá)與空氣對(duì)照組比較無(wú)差異。 2.胎鼠存活率MK-801可明顯地提高各缺氧組的存活率。 3.胎鼠情況加入MK-801，減輕了缺氧所致胎鼠體重下降。各空氣+MK-801組與空氣對(duì)照組比較，胎鼠體重要輕于后者。加入MK-801，減輕了缺氧所致

9、RV/LV+S（％）下降。各空氣+MK-801組與空氣對(duì)照組比較，RV/LV+S（％）要大于后者。 4.胎肺組織HE染色各缺氧+MK-801組較缺氧組肺泡數(shù)量增加，肺泡結(jié)構(gòu)規(guī)則，排列有序，肺泡腔紅細(xì)胞滲出減少。各空氣+MK-801組較空氣組肺泡數(shù)量減少，肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則，排列紊亂，肺泡間隔無(wú)明顯變化，可見肺泡腔明顯紅細(xì)胞滲出。缺氧+MK-801組與缺氧對(duì)照組比，肺小動(dòng)脈改變不明顯，空氣+MK-801組與空氣對(duì)照組比，肺小動(dòng)脈改變不

10、明顯。 5.輻射狀肺泡計(jì)數(shù)（RAC）加入MK-801，減輕了缺氧所致RAC下降。各空氣+MK-801組與空氣對(duì)照組比較，RAC值小于后者。 6.肺血管形態(tài)測(cè)定缺氧+MK-801組較缺氧組，肺血管形態(tài)有改善。缺氧10天+MK-801組與缺氧10天組比，管壁面積/血管總面積（WA％）、管壁厚度（um）、管壁厚度/肺小動(dòng)脈外徑（WT％）的p<0.05?？諝?MK-801組與空氣對(duì)照組比肺血管形態(tài)無(wú)差異。 結(jié)論: