HSP72對大鼠急性高眼壓模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:探討熱休克反應(yīng)和硫酸鋅腹腔內(nèi)注射對急性高眼壓模型大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells,RGCs)中熱休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)表達(dá)的影響,以及HSP72表達(dá)后急性高眼壓模型大鼠RGC密度的改變;闡明HSP72表達(dá)是否對急性高眼壓模型RGC損傷具有保護(hù)作用.方法:①急性高眼壓模型的制作用壓力為102mmHg的平衡鹽溶液在Wistar大鼠右眼前房內(nèi)持續(xù)灌注2小時

2、,制作急性高眼壓模型.②HSP72在高眼壓模型大鼠RGCs中的誘導(dǎo)表達(dá)急性高眼壓模型制作后2天,用熱休克反應(yīng)或腹腔內(nèi)注射硫酸鋅(24.6mg/kg)處理模型大鼠,不同時間段處死大鼠,摘除右眼,剝離視網(wǎng)膜行Western blot分析,檢測HSP72的表達(dá)和時間規(guī)律,以正常眼為對照.③HSP72誘導(dǎo)表達(dá)對模型大鼠RGC密度的影響根據(jù)Western blot分析結(jié)果,實(shí)驗(yàn)組用熱休克反應(yīng)(每周一次)或硫酸鋅腹腔內(nèi)注射(兩周一次)處理急性高眼壓

3、模型大鼠,使HSP72在模型大鼠RGCs中持續(xù)表達(dá);與此同時設(shè)立實(shí)驗(yàn)對照組,在熱休克反應(yīng)或硫酸鋅腹腔內(nèi)注射前4~6小時,腹腔內(nèi)注射槲皮黃酮(400mg/kg),目的是抑制HSP72表達(dá);觀察HSP72被抑制后熱休克反應(yīng)和硫酸鋅腹腔內(nèi)注射對模型大鼠RGC損傷的保護(hù)作用.上述實(shí)驗(yàn)處理后兩周處死大鼠,剝離視網(wǎng)膜,全鋪片后用1％甲苯胺藍(lán)行尼氏染色.400倍顯微鏡下,在視網(wǎng)膜顳上、顳下、鼻上、鼻下四個象限內(nèi)距視乳頭中心1,2,3mm處各取一個0.

4、116×0.157 mm<'2>大小的矩形,行RGC記數(shù),并計(jì)算RGC密度(個/mm<'2>).將視網(wǎng)膜12個矩形內(nèi)RGC密度平均得出整個視網(wǎng)膜的RGC密度.未經(jīng)處理的模型大鼠在前房內(nèi)灌注后第16天處死,取雙眼視網(wǎng)膜行RGC記數(shù),以右眼為損傷組,左眼為正常組.實(shí)驗(yàn)完畢,將各實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對照組平均RGC密度與損傷組平均RGC密度進(jìn)行比較,并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理.結(jié)論:①前房內(nèi)灌注急性高眼壓模型制作后,高眼壓模型Wistar大鼠平均RGC密度較

5、正常組顯著降低;②正常Wistar大鼠視網(wǎng)膜RGCs中沒有HSP72表達(dá);③熱休克反應(yīng)和硫酸鋅腹腔內(nèi)注射均可以在急性高眼壓模型大鼠RGCs中誘導(dǎo)HSP72表達(dá);④槲皮黃酮可以抑制熱休克反應(yīng)和硫酸鋅注射在RGCs中誘導(dǎo)的HSP72表達(dá);⑤熱休克反應(yīng)或硫酸鋅注射在急性高眼壓模型大鼠RGCs中誘導(dǎo)產(chǎn)生的HSP72能夠使急性高眼壓模型大鼠RGC存活率上升;⑥HSP72誘導(dǎo)表達(dá)可能對急性高眼壓模型RGC損傷具有保護(hù)作用,通過誘導(dǎo)HSP72表達(dá)來進(jìn)