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文檔簡介
1、目的:青光眼是由于眼壓升高而引起視乳頭損害和視野缺損的一種致盲性眼病,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retinal ganglion cell,RGC)進行性死亡是其特征性改變,因此,我們治療的最終目標(biāo)在于阻止RGC的損害和保護視功能。多種因素在青光眼的發(fā)病中起重要作用,大量研究表明RGC的丟失可能與谷氨酸(GLU)毒性有關(guān),其興奮毒性損傷主要是由于對N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體的過度刺激引起的。
2、美金胺(Memantine)是一種非競爭性NMDA受體拮抗劑,本實驗通過對急性高眼壓大鼠對照應(yīng)用Memantine,觀察大鼠眼的病理組織學(xué)變化、凋亡基因Caspase-3的表達及RGC凋亡情況,為青光眼的臨床治療提供理論依據(jù)。 方法:健康成年Wistar大白鼠48只,體重200~300g,無眼疾,雌性,隨機將其分為三組:健康對照組(A組)8只、急性高眼壓對照組(B組)20只和美金胺治療組(C組)20只。將Wistar大白鼠予3%
3、戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射,完全麻醉后將連接生理鹽水瓶的5號半針頭沿顳側(cè)角膜緣刺入鼠的前房,然后升高輸液瓶至與動物眼部垂直距離為146厘米處,此高度可在眼內(nèi)形成110mmHg的眼壓。60分鐘后將針頭取出,恢復(fù)視網(wǎng)膜血流灌注,眼底檢查可判定。此時C組腹膜腔內(nèi)注射美金胺,B組腹腔內(nèi)注射生理鹽水,A組不予升高眼壓。分別于高眼壓后6h,24h,72h處死大白鼠,迅速摘除眼球。光鏡下行眼的病理組織學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)方法檢測Caspase-
4、3表達及TUNEL染色觀察細胞凋亡情況。 結(jié)果: 1、眼部情況 B、C兩組急性高眼壓1h后,角膜水腫混濁,未見前房出血;48h后角膜水腫減輕。A組角膜透明,無前房出血。 2、常規(guī)組織病理學(xué)檢查B組大鼠急性高眼壓6h,視網(wǎng)膜明顯水腫,主要在神經(jīng)節(jié)纖維層、內(nèi)核層較明顯,結(jié)構(gòu)尚完整;急性高眼壓24h,視網(wǎng)膜水腫逐漸加重,部分神經(jīng)節(jié)纖維細胞發(fā)生變性;急性高眼壓72h,視網(wǎng)膜水腫較24h時明顯減輕,大部分神經(jīng)節(jié)纖維
5、層發(fā)生空泡變性,水腫基本消失,核溶解、壞死,結(jié)構(gòu)較紊亂。C組大鼠急性高眼壓6h、24h水腫明顯減輕,72h節(jié)細胞層受損減輕。A組均為正常視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)。 3、Caspase-3免疫組織化學(xué)染色在A組大鼠視網(wǎng)膜基本無Caspase-3陽性細胞表達,而在B、C組Caspase.3表達陽性細胞主要為RGC,陽性物質(zhì)位于胞質(zhì),分布不均,呈棕色或淺棕色顯色。B組6h開始出現(xiàn)Caspase-3的表達,24h達高峰,72h下降。C組各觀察指標(biāo)變化
6、趨勢基本同B組,但各時間段的表達強度明顯減弱,兩組比較,于高眼壓6h、24h、72h時段的差別均具有統(tǒng)計學(xué)意義。 4、TUNEL染色在A組,大鼠視網(wǎng)膜基本無TUNEL染色陽性細胞表達。B組TUNEL染色陽性細胞主要為RGC,在高眼壓后6小時開始出現(xiàn),24小時明顯增多,72小時TUNEL染色陽性細胞減少;C組亦在高眼壓后6小時開始出現(xiàn)TUNEL染色陽性細胞,24小時增多,72小時減少;但在C組視網(wǎng)膜TUNEL染色陽性率則明顯低于B
7、組,兩組比較,于高眼壓6h、24h、72h時段差別均具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論: 1、急性高眼壓損傷后RGC有Caspase-3的高表達,表明Caspase-3的活化與高眼壓后RGC凋亡有關(guān)。 2、在急性高眼壓損傷早期即有TUNEL染色陽性的RGC,提示高眼壓是RGC凋亡的重要因素。 3、C組RGC的Caspase-3的表達以及TUNEL陽性染色均明顯低于B組,且眼部病理組織學(xué)改變較B組輕,表明Memanfi
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